Page 41 - 南京医科大学学报自然科学版
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第44卷第2期 马萌萌,包天平,曹林霞,等. 隐丹参酮通过调节TGF⁃β/Smad通路改善高氧诱导肺损伤的纤维化过程[J].
2024年2月 南京医科大学学报(自然科学版),2024,44(2):178-184 ·179 ·
95% O2 incubator for 24 h. 10 μmol/L CTS was added to the intervention group. Cell viability was measured by CCK⁃ 8 assay,and
protein expression of TGF⁃β1,α⁃SMA,p⁃Smad2/3 and Smad2/3 were detected by Western blot. Results:Compared with the control
group,rats in the hyperoxia group had disorderd alveolar morphology,widened alveolar septa,decreased RAC values and increased
fibrosis scores(P < 0.05);increased the mRNA levels of TGF⁃β1 and α⁃SMA(P < 0.05);and up⁃regulated p⁃Smad2/3 expression(P <
0.05). Different doses of CTS could improve the above indicators(P < 0.05). Meanwhile,CTS also reduced TGF⁃β1,α⁃SMA,p⁃Smad2/
3,and Smad2/3 protein expression levels in HFL⁃1 cells after hyperoxia(P < 0.05). Conclusion:CTS ameliorates the fibrotic process
of hyperoxia⁃induced lung injury via the TGF⁃β/Smad pathway.
[Key words] cryptotanshinone;hyperoxia;bronchopulmonary dysplasia;fibrosis
[J Nanjing Med Univ,2024,44(02):178⁃184]
支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia, PC001,南京Proteinbio公司)。
BPD)是早产儿常见的一种慢性呼吸系统疾病,在出 CY⁃12c 型测氧仪(杭州佳长电子科技有限公
生胎龄<29周的新生儿中发病率高达45% [1-2] 。BPD 司);LightCyclePCR 仪(Roche 公司,美国);酶标仪
的发病机制目前仍未明确,其主要的病理学特点 (BioTek公司,美国);电泳仪、凝胶成像仪(BIO⁃RAD
包括肺泡破坏、纤维化、微血管发育异常以及气道 公司,美国)。
损害 [3] ,其中肺纤维化是 BPD 的主要病理特征。 人胚肺成纤维细胞(HFL⁃1)购于无锡欣润生物
在高氧诱导的 BPD 模型中,肺泡的发育、修复和再 科技有限公司,培养于含10%胎牛血清的Ham’s F⁃
生受到成纤维细胞的影响,从而导致细胞外基质 12K 培养基中,置于含 5%CO2的 37 ℃恒温培养箱
(extracellular matrix,ECM)的 重 塑 及 纤 维 化 的 发 中。SD 大鼠[生产许可证编号 SCXK(京)2019⁃
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展,导致肺部纤维化进一步加重 。目前,对于这种 0010]饲养于南京医科大学附属淮安第一医院,选取
长期存在的慢性呼吸道疾病,既不能预防也不能有效 12周龄的SD大鼠按雄雌比例1∶3进行合笼,待所有
治疗,因此寻找BPD的特效药十分重要。 孕鼠自然分娩后选取 24 h 内雄性 SD 大鼠用。本研
隐丹参酮(cryptotanshinone,CTS)是从传统中药 究已获得南京医科大学附属淮安一院伦理委员会
丹参中提取的一种活性成分,其生物学活性丰富, 批准(伦理编号:DW⁃P⁃2023⁃001⁃10)。
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具有抗炎 、抗纤维化 、抗肿瘤 及神经保护 等 1.2 方法
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作用。近期研究表明,CTS 可以通过逆转上皮间充 1.2.1 动物分组与造模
质转化 、抑制Smad及STAT3通路 [10] 来改善博来霉 新生SD雄性大鼠随机分为5组,每组8只,分别
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素诱导的肺纤维化,但在高氧诱导的肺损伤纤维化 为空气组、高氧组、CTS 低剂量组(7.5 mg/kg)、CTS
中,尚无相关报道,本研究利用高氧诱导新生鼠 中剂量组(15 mg/kg)及 CTS 高剂量组(30 mg/kg)。
BPD 模型及体外人胚肺成纤维细胞培养模型,旨在 高氧组及 CTS 干预组连续吸入 95%O2 7 d,空气组
探讨CTS在高氧引致的肺纤维化中的作用及机制。 置于室内环境(21%O2 )中7 d。每日8:30 —9:30开
箱操作,CTS溶于DMSO中进行腹腔注射,高氧组及
1 材料和方法
空气组同时注射等量的DMSO。氧浓度分析仪连续
1.1 材料 监测箱内氧气浓度,并放置钠石灰吸收老鼠呼出的
CTS(纯度≥ 98%,批号 HY⁃NO174,MCE 公司, CO2,哺乳鼠每日在高氧和空气环境之间交换,以防
美国);α⁃SMA、TGF⁃β1、Smad2、p⁃Smad2、Smad3 止母鼠不耐受高氧出现死亡情况。7 d后对全部鼠实
(Abcam 公 司 ,英 国);p⁃Smad3(批号9520T,CST 施安乐死,立即取左肺上叶用4%多聚甲醛固定供)苏
公司,美国);GAPDH(批号 6004⁃1⁃ig,武汉三鹰 木精⁃伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)和马松(Masson)染
Proteintech 公 司);Ham’s F ⁃ 12K 培 养 基(批 号 色实验用,剩余肺组织置于-80 ℃冰箱中待测。
A211013,上海BasalMedia公司);RIPA裂解液、蛋白 1.2.2 肺组织病理学检测
酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、ECL 发光液(苏州新赛美 左肺上叶用4%多聚甲醛固定过夜后包埋在蜡
生物科技有限公司);逆转录试剂盒、聚合酶链反应 块中,切成4 μm厚的连续切片,之后在室温条件下进
试剂盒、CCK⁃8 溶液(批号分别为 PE5402、PC5902、 行HE染色以及Masson染色。根据HE染色情况,每