Page 41 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 41

第44卷第2期 马萌萌，包天平，曹林霞，等. 隐丹参酮通过调节TGF⁃β/Smad通路改善高氧诱导肺损伤的纤维化过程［J］.
                  2024年2月                     南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（2）：178-184                        ·179 ·


                95% O2 incubator for 24 h. 10 μmol/L CTS was added to the intervention group. Cell viability was measured by CCK⁃ 8 assay，and
                protein expression of TGF⁃β1，α⁃SMA，p⁃Smad2/3 and Smad2/3 were detected by Western blot. Results：Compared with the control
                group，rats in the hyperoxia group had disorderd alveolar morphology，widened alveolar septa，decreased RAC values and increased
                fibrosis scores（P < 0.05）；increased the mRNA levels of TGF⁃β1 and α⁃SMA（P < 0.05）；and up⁃regulated p⁃Smad2/3 expression（P <
                0.05）. Different doses of CTS could improve the above indicators（P < 0.05）. Meanwhile，CTS also reduced TGF⁃β1，α⁃SMA，p⁃Smad2/
                3，and Smad2/3 protein expression levels in HFL⁃1 cells after hyperoxia（P < 0.05）. Conclusion：CTS ameliorates the fibrotic process
                of hyperoxia⁃induced lung injury via the TGF⁃β/Smad pathway.
               ［Key words］ cryptotanshinone；hyperoxia；bronchopulmonary dysplasia；fibrosis
                                                                              ［J Nanjing Med Univ，2024，44（02）：178⁃184］





                    支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，          PC001，南京Proteinbio公司）。
                BPD）是早产儿常见的一种慢性呼吸系统疾病，在出                              CY⁃12c 型测氧仪（杭州佳长电子科技有限公
                生胎龄<29周的新生儿中发病率高达45％                 ［1-2］ 。BPD   司）；LightCyclePCR 仪（Roche 公司，美国）；酶标仪
                的发病机制目前仍未明确，其主要的病理学特点                            （BioTek公司，美国）；电泳仪、凝胶成像仪（BIO⁃RAD
                包括肺泡破坏、纤维化、微血管发育异常以及气道                            公司，美国）。
                损害  ［3］ ，其中肺纤维化是 BPD 的主要病理特征。                         人胚肺成纤维细胞（HFL⁃1）购于无锡欣润生物
                在高氧诱导的 BPD 模型中，肺泡的发育、修复和再                         科技有限公司，培养于含10％胎牛血清的Ham’s F⁃
                生受到成纤维细胞的影响，从而导致细胞外基质                             12K 培养基中，置于含 5％CO2的 37 ℃恒温培养箱
               （extracellular matrix，ECM）的 重 塑 及 纤 维 化 的 发        中。SD 大鼠［生产许可证编号 SCXK（京）2019⁃
                                            ［4］
                展，导致肺部纤维化进一步加重 。目前，对于这种                           0010］饲养于南京医科大学附属淮安第一医院，选取
                长期存在的慢性呼吸道疾病，既不能预防也不能有效                           12周龄的SD大鼠按雄雌比例1∶3进行合笼，待所有
                治疗，因此寻找BPD的特效药十分重要。                               孕鼠自然分娩后选取 24 h 内雄性 SD 大鼠用。本研
                    隐丹参酮（cryptotanshinone，CTS）是从传统中药              究已获得南京医科大学附属淮安一院伦理委员会
                丹参中提取的一种活性成分，其生物学活性丰富，                            批准（伦理编号：DW⁃P⁃2023⁃001⁃10）。
                        ［5］
                具有抗炎 、抗纤维化 、抗肿瘤 及神经保护 等                           1.2  方法
                                    ［6］
                                             ［7］
                                                          ［8］
                作用。近期研究表明，CTS 可以通过逆转上皮间充                          1.2.1 动物分组与造模
                质转化 、抑制Smad及STAT3通路            ［10］ 来改善博来霉            新生SD雄性大鼠随机分为5组，每组8只，分别
                      ［9］
                素诱导的肺纤维化，但在高氧诱导的肺损伤纤维化                            为空气组、高氧组、CTS 低剂量组（7.5 mg/kg）、CTS
                中，尚无相关报道，本研究利用高氧诱导新生鼠                             中剂量组（15 mg/kg）及 CTS 高剂量组（30 mg/kg）。
                BPD 模型及体外人胚肺成纤维细胞培养模型，旨在                          高氧组及 CTS 干预组连续吸入 95％O2 7 d，空气组
                探讨CTS在高氧引致的肺纤维化中的作用及机制。                           置于室内环境（21％O2 ）中7 d。每日8：30 —9：30开
                                                                  箱操作，CTS溶于DMSO中进行腹腔注射，高氧组及
                1  材料和方法
                                                                  空气组同时注射等量的DMSO。氧浓度分析仪连续
                1.1  材料                                           监测箱内氧气浓度，并放置钠石灰吸收老鼠呼出的
                    CTS（纯度≥ 98％，批号 HY⁃NO174，MCE 公司，               CO2，哺乳鼠每日在高氧和空气环境之间交换，以防

                美国）；α⁃SMA、TGF⁃β1、Smad2、p⁃Smad2、Smad3              止母鼠不耐受高氧出现死亡情况。7 d后对全部鼠实
               （Abcam 公 司 ，英 国）；p⁃Smad3（批号9520T，CST               施安乐死，立即取左肺上叶用4％多聚甲醛固定供）苏
                公司，美国）；GAPDH（批号 6004⁃1⁃ig，武汉三鹰                    木精⁃伊红（hematoxylin⁃eosin，HE）和马松（Masson）染
                Proteintech 公 司）；Ham’s F ⁃ 12K 培 养 基（批 号          色实验用，剩余肺组织置于-80 ℃冰箱中待测。
                A211013，上海BasalMedia公司）；RIPA裂解液、蛋白                1.2.2 肺组织病理学检测
                酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、ECL 发光液（苏州新赛美                             左肺上叶用4％多聚甲醛固定过夜后包埋在蜡
                生物科技有限公司）；逆转录试剂盒、聚合酶链反应                           块中，切成4 μm厚的连续切片，之后在室温条件下进
                试剂盒、CCK⁃8 溶液（批号分别为 PE5402、PC5902、                 行HE染色以及Masson染色。根据HE染色情况，每
   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46