Page 62 - 南京医科大学自然版
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第44卷第4期
·500 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年4月
The distributions of CD3，CD8，CD19，IL⁃10 and TNF were different among the four groups（P=0.046，P=0.048，P=0.041，P=0.042，
P=0.013）. Conclusion：The blood cell counts and FLT3 mutation types of AML patients are associated with the expression levels of
lymphocyte subsets and cytokines. This may contribute to the risk stratification of AML and have a certain impact on the prognosis of
AML patients.
［Key words］ acute myeloid leukemia；FMS like tyrosine kinase 3 receptor；lymphocyte subgroups；cytokines；blood cell count
［J Nanjing Med Univ，2024，44（04）：499⁃504］
急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML） DNA，利用Ion Torrent S5 NGS测序平台对患者FLT3
是血液科常见的恶性血液病之一，其发病机制复 进行靶向扩增子法深度测序，平均测序深度2 000×
杂，具有高度异质性，其中，细胞免疫功能异常是其 以上，平均突变检出灵敏度3%，并用PCR⁃毛细管电
中的重要机制之一，且AML患者自身免疫功能紊乱 泳法验证检测FLT3⁃ITD突变。
与疾病的发展过程具有相关性 。随着分子生物学 1.2.2 细胞因子表达水平检测
［1］
的发展，AML患者的基因突变越来越受到人们的重 收集健康对照组及 AML 患者治疗前外周血约
视，其中 FMS 样酪氨酸激酶 3 受体（FMS like tyro⁃ 2 mL，2 000 r/min 离心 20 min，获得约 0.5 mL 血浆，
sine kinase 3 receptor，FLT3）基因突变已成为评估 4 ℃保存，使用酶联免疫吸附法及配套试剂盒（上海
AML 预后的重要分子标志 ，其突变主要分为内部 酶联生物，货号ml063122）检测血清IL⁃2、IL⁃4、IL⁃6、
［2］
串联重复序列（internal tandem duplication，ITD）突变 IL⁃10、TNF、干扰素⁃γ（interferon gamma，IFN⁃γ）。
和酪氨酸激酶结构域（tyrosine kinase domain，TKD） 1.2.3 淋巴细胞亚群检测
点突变及其他类型的突变 ［3-4］ 。近年来多有报道淋 收集健康对照组及 AML 患者治疗前外周血
巴细胞亚群及细胞因子在 AML 患者中的意义，在 2 mL，分别取 100 μL 外周血加入 2 个试管，与 5 μL
AML患者中淋巴细胞亚群紊乱，有研究指出在初治 4 色 抗 体（CD3FITC/CD8PE/CD45Percp/CD4APC；
AML 患者中 CD4 T 细胞表达水平升高，CD8 T 细胞 CD3FITC/CD16+56PE/CD45Percp/CD19APC）（Beck⁃
+
+
表达水平下降 ［5-6］ ；细胞因子如白介素 6（interleukin man Coulter公司，加拿大）室温下避光孵育30 min，加
6，IL⁃6）、肿瘤坏死因子（trmor necrosis factor，TNF） 入红细胞裂解液2 mL，避光孵育10 min，1 200 r/min
等在AML患者中呈现出高表达状态，且预后不良 ［7-8］ 。 离心 5 min，弃去上清，加 PBS 3 mL，洗 1 次弃上清，
本研究结合血细胞计数，分析伴FLT3突变患者的细 加500 μL PBS悬浮细胞。T淋巴细胞（CD3）、T辅助
胞因子及淋巴细胞亚群的相关性，探索AML患者的 性细胞亚群（CD4）、T抑制性细胞亚群（CD8）以及总
发病机制及实验室指标的临床意义。 B 淋巴细胞（CD19）和 NK 细胞（CD16+CD56）通过
BD流式细胞仪（BD公司，美国）、BD FACS Canto临床
1 对象和方法
计算软件进行分析。
1.1 对象 1.3 统计学方法
选取2017年1月—2022年12月南京医科大学附 采用SPSS 24.0软件及GraphPad Prism 5统计软
属江宁医院及南京医科大学第一附属医院收治的 件进行数据分析；符合正态分布的计量资料以均
168例初治无感染的伴FLT3基因突变的AML（不包含 值±标准差（x ± s）表示，偏态分布资料以中位数（四
急性早幼粒细胞白血病）患者，其中，男98例，女70例， 分位数）［M（P25，P75）］表示；外周血淋巴细胞亚群、
中位年龄 51（18~82）岁。选取 40 例健康体检者纳 细胞因子表达水平与健康对照组比较采用独立样
入健康对照组，男 22 例，女 18 例，中位年龄 39（20~ 本t检验，不同分组间的淋巴细胞亚群、细胞因子表
70）岁。本研究通过南京医科大学附属江宁医院伦理委 达水平比较采用单因素方差分析，P < 0.05 为差异
员会批准（伦理号：2023-03-069-K01），并知情同意。 有统计学意义。
1.2 方法
2 结 果
1.2.1 FLT3突变检测
抽取AML患者骨髓，采用裂解红细胞方法得到 2.1 伴FLT3突变的AML患者淋巴细胞亚群的表达
单个核细胞，通过QIAamp DNA Blood mini kit 试剂 水平
®
盒（货 号 51104，Qiagen 公 司 ，美 国）提 取 基 因 组 与健康对照组比较，治疗前患者外周血 CD3、
