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第44卷第5期 周俊发，乔婷婷，张志宏，等. 胆酸和去氧胆酸抗惊厥作用的血清代谢组学研究［J］.
2024年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（5）：604-614 ·607 ·

在光学显微镜下观察海马组织 CA1 和 CA3 神经元 级碎裂结构，使用 MetaboAnalyst 进行主成分分析
病理形态变化。 （principal component analysis，PCA），正交偏最小二
1.2.6 血清代谢组学分析 乘法判别分析（orthogonal partial least squares⁃dis⁃
1.2.6.1 样品前处理 criminant analysis，OPLS⁃DA）。借助HMDB代谢数据
取出冻存的大鼠血清 60 μL，加入 600 μL 质谱 库将化合物名称转换为HMDB ID后，在MetaboAna⁃
级纯甲醇涡旋混匀，4 ℃ 15 000 r/min 离心 10 min。 lyst 网 站 通 过 KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes
取上清液在50 ℃ 1 700 r/min，真空度为10的条件下 and Genomes）数据库进行通路富集和通路分析。
离心浓缩。待溶剂挥干后，加入100 μL的50%甲醇 1.3 统计学方法
复溶涡旋混匀，随后 4 ℃ 15 000 r/min 离心 10 min。 采用 GraphPad Prism 8.00 软件对实验数据进
各样品管中取 60 μL 上清液于质谱进样瓶中，用于 行统计分析，实验结果采用单因素方差分析比较不
上样检测。再在各样品中分别吸取20 μL上清液于 同组间差异，对于两组以上的比较，则采用Tukey’s
4 ℃ 15 000 r/min 离心 10 min，取 100 μL 上清液用 分析进行事后检验。P < 0.05为差异有统计学意义。

作质量控制（quality control，QC）。取100 μL的50%
2 结 果
甲醇于进样瓶中，作为空白溶剂。
1.2.6.2 超高效液相色谱仪串联高分辨质谱检测条件 2.1 大鼠惊厥行为学观察
将各样品随机排序上机检测，每10个样品中插 模型惊厥表现：当热水浴开始时，大鼠表现为四
入1个QC样品用于质控分析。 处探索，因水温不适而出现跳跃等动作。大约2 min
色谱条件：柱温 40 ℃，样品盘温度 10 ℃，进样 后，因体力消耗，大鼠挣扎频率变慢，跳跃幅度变
体积：2 μL，流速：0.4 mL/min，流动相A相：0.1%甲酸 小。随后出现失神发作，间歇性仰头，在水中静止，
水溶液，B相：乙腈，梯度洗脱（0~6.0 min：95%A→30% 偶尔下沉。惊厥发生时大鼠先是出现肢体轻微抽
A；6.0~11.0 min：30%A→0%A；11.0~14.0 min：0%A； 动，而后多肢抽动甚至全身抽搐，多次发作。有时
14.0~14.1 min：0→95%A；14.1~17.0 min：95%A）。 身体因剧烈抽搐而呈现反弓状，甚至从桌面弹起，
质谱条件：使用赛默飞旗下三合一Orbitrap Fusion 全身强直。停止抽搐后大鼠处于失神状态，四肢无
进行质谱检测，负离子模式，离子传输管温度为300 ℃； 力。约 3~5 min 后恢复意识，表现为抬头，主动探
电压为 2 800 V；蒸发温度为 320 ℃；鞘气 20 Arb；反 索，舔毛，恢复自主爬行。
吹气 8 Arb；检测分辨率为 30 000；质荷比范围为 与模型组惊厥表现相比，VPA 和 CA 以及 DCA
120~1200 m/z。 组均显著延长大鼠的惊厥潜伏期、缩短惊厥持续时
1.2.6.3 数据处理分析 间，表现出良好的治疗作用（P 均 < 0.001，图 1A、
借助Orbitrap Fusion Tune 3.0进行数据采集，使 B）。与模型组相比，VPA组和DCA组大鼠惊厥发作
用 X calibur 4.1 调取总离子流图。使用 Compound 的严重程度显著降低（P < 0.001 和 P < 0.01），CA 也
Discoverer 3.3进行峰和保留时间的识别、提取、校正 能降低惊厥大鼠发作的严重程度，但能力稍弱（P <
以及归一化处理。借助 Mass Fronier 8.0 推测峰二 0.05，图1C）。

A B C
400 400 6
（s） 300 *** *** *** （s） 300 4 * **
Latency of seizures 200 Duration of seizures 200 *** *** *** The severity of seizures 2 ***

100
100
0 0 0
Model VPA CA DCA Model VPA CA DCA Model VPA CA DCA
*
**
***
Compared with the model group，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=9）.
图1 各组大鼠的惊厥潜伏期（A）、惊厥持续时间（B）和惊厥发作等级（C）的比较
Figure 1 Comparisons of the convulsive latency（A），convulsive duration（B），and convulsive seizure grade（C）of rats in
each group