Page 14 - 南京医科大学自然版

第44卷第5期
·602 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年5月

A B
（%） 15 *** IBMDM Control
S.T
S.T
-
S.T Cell containing ASC speck 10 5 GSK8612 - + - + + Oligomer 1.5 S.T+GSK8612 ***
***
kDa
100
1.0
ASC/DAPI merge 0 S.T+GSK8612 Insoluble+DSS 50 Dimer Relative protein expression level 0.5 0 Oligomer Dimer Monomer
***
S.T
S.T+GSK8612 Soluble 25 Monomer
25
ASC
35
GAPDH

A：S.T（MOI：10）was used to infect IBMDM for 2 h，and endogenous ASC specks were detected by immunofluorescence（arrow）. Scale bar：20 μm. B：
After infecting IBMDM with S.T（MOI：10）for 2 h，insoluble samples crosslinked with DSS were taken for protein immunoblotting to detect oligomeriza⁃
**
*
tion. P < 0.05，P < 0.01，and *** P < 0.001（n=3）.
图3 抑制TBK1减弱NLRC4炎症小体的ASC寡聚化和斑点化
Figure 3 The inhibited TBK1 expression reduces ASC speck formation and oligomerization of NLRC4 inflammasome

A B
NLRC4 Ser533A
NLRC4 NLRC4 Ser533A
Myc⁃NLRC4 + + + + NLRC4 Ser533D
Flag⁃TBK1 - + - + NLRC4
kDa
Myc⁃NLRC4 + + + +
110 p⁃Ser（NLRC4） Flag⁃TBK1 - + + +
kDa
IP：Myc 110 p⁃NLRC4（Ser533）
110 Myc
IP：Flag
110 Myc
80 Flag
110 Myc
110 Myc
Input
Input
80 Flag
80 Flag
A：The overexpression of Myc⁃NLRC4 or its mutant NLRC4 Ser533A and Flag⁃TBK1 in HEK293T cells was performed to immunoprecipitation
and Western blot analysis. B：The overexpression of Myc⁃NLRC4 or its mutant NLRC4 Ser533A/Ser533D with Flag⁃TBK1 in HEK293T cells was
performed for co⁃immunoprecipitation and Western blot analysis.
图4 TBK1磷酸化NLRC4 Ser533位点
Figure 4 TBK1 phosphorylates NLRC4 Ser533

环境，提高小鼠防御S.T感染的能力。 NLRC4 炎症小体激活的调节机制是近来研究
的热点。本研究发现 TBK1 与 NLRC4 相互作用，抑
3 讨 论
制 TBK1 的活性可以下调 S.T 诱导的 NLRC4 炎症小
NLRC4 炎症小体在防御胞内菌感染过程中发 体活化。TBK1 作为重要的炎症调节激酶参与多种
挥了重要作用，当宿主细胞受到胞内菌（如S.T）感染 炎症通路的调节 ［9-10］ ，本研究发现TBK1对NLRC4炎
时，S.T 通过其 T3SS 分泌系统将毒力蛋白分泌到胞 症小体的调节作用，为多种信号通路与炎症小体通
内，随后被胞内受体 NAIP 识别并结合，激活后的 路的交叉调节提供了新线索。NLRC4 Ser533 位磷
NAIP与 NLRC4 结合并解除其自身抑制结构，从而 酸化作为NLRC4炎症小体调节的重要环节，已发现
招募ASC等蛋白组装形成炎症小体。激活Caspase⁃1， 蛋白激酶C⁃δ（protein kinase C⁃δ，PKC⁃δ）对其的磷酸
促进 IL⁃1β和 IL⁃18 的成熟，切割 GSDMD，诱导细胞 化作用 ，而本研究发现TBK1可以作为NLRC4的磷
［3］
焦亡。然而，对于NLRC4炎症小体的具体调控机制 酸化酶对其活性进行调节，丰富了该位点调节的多样
仍然不清。 性，符合炎症调节网络化的特性。炎症小体的过度激