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第44卷第6期
               ·840 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2024年6月


             （albumin，ALB）、血肌酐（creatinine，CRE）、乙肝表面             量资料以中位数（四分位数）［M（P25，P75）］表示，两
              抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙肝 e 抗      组比较采用 Mann⁃Whitney U 检验，多组比较采用
              原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、HBV脱氧核糖核酸          Kruskal⁃Wallis检验。变量间相关性分析采用Spear⁃
             （deoxyribonucleic acid，DNA）等辅助检查结果；④腹              man检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
              水评分（1分：无腹水；2分：少量腹水；3分：中~大量腹
                                                                2  结 果
              水）和肝性脑病评分（1分：无肝性脑病；2分：1~2级肝
              性脑病；3 分：3~4 级肝性脑病）。根据基线数据，计                       2.1  3组研究对象基线特征比较
              算HBV⁃ACLF患者的Child⁃Turcotte⁃Pugh（CTP）评分                 HBV⁃ACLF 组性别构成、年龄、WBC、NEUT 和
              和终末期肝病模型（model for end⁃stage liver disease，       CRE 相比 HC 和 CHB 组，差异无统计学意义（P 均>
                                             ［13］
              MELD）评分，具体公式参照相关文献 。                              0.05）。HBV⁃ACLF 组 NLR、INR 和 TBil 均显著高于
              1.2.2 流式细胞术检测外周血MDSC频率                            HC 和 CHB 组；LYMT 和 ALB 均低于 HC 和 HBV 组，
                  基线时，使用 EDTA 抗凝管采集外周血静脉血                       差异有统计学意义（P 均<0.001）。与 CHB 组比较，
              5 mL，采用人淋巴细胞分离液（Axis⁃shield 公司，                   HBV⁃ACLF 组肝硬化患者比例、合并细菌感染患者
              挪威）和密度梯度离心法分离外周血单个核细胞                             比例和 PCT 均升高，差异有统计学意义（P 均<
             （peripheral blood mononuclear cell，PBMC），1 mL 磷    0.01）；但2组HBsAg、HBeAg、HBV DNA 和ALT水平
              酸缓冲盐溶液（phosphoric acid buffer salt solution，      比较，差异无统计学意义（P均>0.05，表1）。
              PBS）重悬细胞，0.4%台酚蓝计数并调整细胞浓度为                        2.2 3组外周血MDSC频率的比较
                   6
              2×10 个/mL。采用流式细胞术检测 PBMC 中 PMN⁃                        HBV⁃ACLF 组、CHB 组、HC 组外周血 M⁃MDSC
              MDSC频率，主要步骤包括：①取100 μL PBMC悬液                     频率分别为 2.20%（1.41%，3.01%）、1.41%（0.90%，
                   5
             （2×10 个细胞）加入5 mL 流式管中，分别加入APC⁃                     1.92%）和 0.57%（0.43%，0.67%），整体差异有统计
              HLA⁃DR、FITC⁃CD11b、Alexa Fluor700⁃CD33、PE⁃         学意义（H=29.672，P < 0.001）；HBV⁃ACLF组外周血
              Cy7⁃CD14 和 PE⁃CD15 流式单抗（Biolegend 公司，美            M⁃MDSC 频率高于 CHB 组和 HC 组，差异有统计学
              国）各2 μL，避光孵育20 min；②加入2 mL PBS吹打                  意义（P 均<0.05）；CHB 组外周血 M⁃MDSC 频率高于
              混匀细胞，离心、弃上清，并重复该步骤1次；③加入                          HC 组，差异有统计学意义（P=0.008，图 1A）。HBV⁃
              流式鞘液 200 μL 重悬细胞，使用贝克曼公司 Cyto⁃                    ACLF 组、CHB 组、HC 组外周血 PMN⁃MDSC 频率分
              flex S 流式细胞仪检测外周血 MDSC 频率（PBMC 中                  别为 3.77%（1.35%，5.11%）、0.67%（0.55%，0.82%）
              MDSC 占比），PMN⁃MDSC 标记策略为 HLA⁃DR              -/low  和 0.50%（0.40%，0.59%），整体差异有统计学意义
              CD11b CD33 CD14 CD15 细胞，M⁃MDSC 标记策略              （H=44.401，P < 0.001）；HBV⁃ACLF组外周血M⁃MDSC
                          +
                               -
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              为HLA⁃DR   -/low CD11b CD33 CD14 CD15 细胞。          频率高于CHB组和HC组，差异有统计学意义（P均
              1.2.3 细菌真菌感染诊断标准及患者短期预后评估                         <0.001）；CHB 组和HC组外周血PMN⁃MDSC 频率比
                  临床医师综合患者临床表现、感染标志物、影                          较，差异无统计学意义（P=0.421，图1B）。
              像学检查、微生物学培养、宏基因二代测序及经验                            2.3  HBV⁃ACLF 外周血 PMN⁃MDSC 频率与炎症指
              性抗感染疗效，对合并/继发细菌真菌感染进行诊                            标、疾病严重度的相关性分析
              断，各部位感染的具体诊断标准参照《终末期肝病                                 Spearman 检验显示，HBV⁃ACLF 患者外周血
              合并感染诊治专家共识（2021年版）》 。访视期第                         PMN⁃MDSC 频率与炎症指标 WBC、NLR、PCT 表达
                                               ［14］
              28天评估HBV⁃ACLF患者的预后情况，患者短期预                        水 平 均 呈 正 相 关（r=0.347、0.799、0.506，P 均 <
              后差定义为：28 d访视期内死亡，或放弃治疗自动出                         0.05），与 LYMT 呈负相关（r=-0.428，P < 0.01，图
              院，或接受肝移植手术。                                       2A~D）。HBV⁃ACLF 外周血 PMN⁃MDSC 频率与疾

              1.3  统计学方法                                        病严重度指标 INR、TBil、CTP 评分、MELD 评分均
                  采用 SPSS 22.0 和 GraphPad Prism 9.5 对数据进        呈正相关（r=0.450、0.462、0.470、0.481，P 均<0.01，
              行统计分析。计数资料以例数（百分比）［n（%）］表                         图 2E~H）。
              示，组间比较采用χ 检验。正态分布计量资料以均                           2.4  HBV⁃ACLF 外周血 PMN⁃MDSC 频率与患者合
                               2
              数±标准差（x ± s）表示，两组比较采用独立样本t 检                      并或继发感染、短期预后的关系
              验，多组比较采用单因素方差分析。非正态分布计                                 40例HBV⁃ACLF 患者中，入院时合并感染共计
   99   100   101   102   103   104   105   106   107   108   109