Page 12 - 南京医科大学自然版

第44卷第7期
·896 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年7月

A Young Old Put

B C D **
** 0.15 （nm） 2000 ** **
80
（nm） 60 *** *** 0.10 1500
MAM distance 40 MAM surface area/ mitochondrion perimeter 0.05 Mitochondrial perimeter 1000

20
500
0 0 0
Young Old Put Young Old Put Young Old Put
A：Characteristic TEM images of mitochondria and ER in the MⅡ⁃stage oocytes（scale bars=200 nm）. The yellow parts represent mitochondria，the
green parts represent ER，and the blue parts represent MAM. B：Statistical analysis of the distances between the ER and mitochondria. C：Ratio of
the length of the mitochondria adjacent to the ER to mitochondrial circumference. D：Statistical analysis of mitochondrial perimeter（n=20）. P < 0.01，
**
***
P < 0.001. TEM：transmission electron microscopy；Mito：mitochondria；ER：endoplasmic reticulum；MAM：mitochondria⁃associated endoplasmic
reticulum membrane.
图4 MⅡ期卵母细胞MAM水平
Figure 4 MAM levels in MⅡ⁃stage oocytes

短，而腐胺组MAM间距显著增加（P < 0.001，图 4B）。 AM测定小鼠MⅡ期卵母细胞内细胞质、线粒体和内
3 组间卵母细胞的线粒体中组成 MAM 部分长度与 质网Ca 浓度，即［Ca ］ i、［Ca ］ m和［Ca ］ ER （图 6A）。
2+
2+
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2+
其周长的差异无统计意义（图 4C），可能与高龄小鼠 实验表明，IVM 培养液中添加腐胺能够显著缓解高
卵母细胞内线粒体肿胀变形，周长增加相关（P < 0.01， 龄小鼠 MⅡ期卵母细胞线粒体钙超载（P < 0.001，
图 4D）。这些结果表明腐胺可使高龄卵母细胞内 图 6B）。此外，高龄小鼠MⅡ期卵母细胞［Ca ］ ER水
2+
线粒体和内质网间距离增加，并因此降低其 MAM 平降低（P < 0.001，图 6C），添加腐胺后水平显著升
水平。 高（P < 0.001，图 6C）。而 3 组卵母细胞的［Ca ］ i无
2+
2+
2.5 腐胺降低高龄 MⅡ期卵母细胞 MAM 间 Ca 传 显著性差异（图 6D）。由此推测：高龄小鼠卵母细胞
递关键分子的表达 线粒体内超载的 Ca 来源于内质网，且腐胺能够通
2+
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三磷酸肌醇受体（75⁃KDA inositol 1，4，5⁃triphos⁃ 过影响MAM间Ca 运输缓解线粒体钙超载。
phate receptor，IP3R）、葡萄糖调节蛋白 75（glucose 2.7 腐胺改善高龄小鼠卵母细胞线粒体功能
regulated protein 75，GRP75）和电压依赖性阴离子通 使用JC⁃1染色评估小鼠MⅡ期卵母细胞的线粒
道 1（voltage dependent anion channel 1，VDAC1）是 体膜电位（图 7A）。高龄 MⅡ期卵母细胞线粒体膜
MAM间Ca 转移的关键分子 ［11］ 。使用qPCR分别测 电位水平（Δψm）显著下降（P < 0.001，图 7C），ATP含
2+
定 MⅡ期卵母细胞中 IP3R、GRP75 和 VDAC1 的基 量下降（P < 0.001，图 7D），ROS水平升高（P < 0.001，
因相对表达量。结果显示，高龄小鼠 MⅡ期卵母细 图7B、E）。腐胺添加恢复了Δψm（P < 0.05，图 7C），
胞内IP3R的相对mRNA含量显著增高，添加腐胺后 同时增加了 ATP 含量（P < 0.01，图 7D），降低 ROS
显著下降（P < 0.05，图5A）。同时，高龄小鼠MⅡ期 水平（P < 0.001，图 7E）。提示腐胺可改善高龄小鼠
卵母细胞内GRP75的相对mRNA含量显著增高，添 MⅡ期卵母细胞的线粒体功能，缓解氧化应激。
加腐胺后显著下降（P < 0.001，图 5B）。3 组 MⅡ期
3 讨 论
卵母细胞内 VDAC1 的相对 mRNA 含量差异无统计
学意义（图 5C）。 女性35岁以后的卵巢储备功能迅速下降 ［12］ ，卵

2.6 腐胺缓解高龄小鼠期卵母细胞线粒体钙超载 母细胞的衰老使生育力降低。卵母细胞是人体中
分别使用 Fluo⁃4 AM、Rhod⁃2 AM 和 Mag⁃Fluo⁃4 最大的细胞，对其老化的机制和过程，以及可能逆