Page 12 - 南京医科大学自然版

第44卷第8期
·1040 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年8月

组复合体的水合直径与pHIV⁃Luciferase组相比略有 载体质粒复合体的水合直径和分散系数的变化差
变大，但变化幅度在所有分组中变化最小（图 2C）。 异无统计学意义（图 2E）。同时，使用肝素和 DNA
综合考虑，选择了质量比为 4.0 进行后续实验。通 酶对其进行干扰，结果显示，SPFT 对质粒有保护作
过 SEM 观察 SPFT/pHIV⁃Luciferase 复合体的形貌和 用，保持了其完整性（图2F）。考虑到小鼠体内实验
尺寸，SPFT/pHIV⁃Luciferase 复合体形貌规整且尺寸 需要用5%Glu进行溶液配制，在5%Glu的条件下评
分布均一，粒径在100 nm左右（图2D）。 估载体质粒复合体的稳定性，5%Glu 溶液与水溶液
2.4 SPFT质粒复合体具有良好的稳定性 相比，材料在 0 h 时的水合直径差异无统计学意义
稳定性分析是为了评估材料是否能够在长时 （图2G）。SPFT质粒复合体在5%Glu中48 h内水合
间内稳定地包裹质粒，是载体表征中的一个重要指 粒径无明显变化；但在水溶液中SPFT质粒复合体水
标。同时，水合直径是评估SPFT质粒复合体稳定性 合直径在24 h时略有降低，且在48 h时水合直径恢
的关键指标之一。为了评估 SPFT 质粒复合体的稳 复。另一方面，5%Glu 溶液中 SPFT 质粒复合体的
定性，将其置于 4 ℃条件下，每 24 h（即在第 0、24、 PDI显著降低（图2H）。综上所述，SPFT质粒复合体

48、72 h）测定其水合直径。随着时间的推移，SPFT 表现出良好的稳定性。

A The mass ratios of The mass ratios of B
PEI25k：pHIV⁃Luciferase SPFT：pHIV⁃Luciferase
Naked
Marker DNA 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0
400 Size 1.0
PDI 0.8
300
（nm） 200 0.4
Size 100 0.2
0.6 PDI
0
0 -0.2
0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0
SPFT：pHIV⁃Luciferase（wt/wt）
C pHIV⁃Luciferase D SPFT/pHIV⁃Luciferase E Size
400 lentiCRISPR v2 250 PDI 0.8
0.6
（nm） 300 （nm） 200 0.4 PDI
150
200
Size 100 Size 100 0.2
0.0
0 50 -0.2
0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 0 h 24 h 48 h 72 h
SPFT：Plasmid（wt/wt） SPFT：pHIV⁃Luciferase（wt/wt）=4.0
F pDNA + + + + + G 5% Glu H 5% Glu
250 0.8
SPFT - + - + + ddH2O ddH2O
DNase⁃Ⅰ - - + + - * **
Heparin - - - - + 200 0.6 ** **
（nm） 150 PDI 0.4
Size
100 0.2

50 0
0 h 24 h 48 h 0 h 24 h 48 h
SPFT：pHIV⁃Luciferase（wt/wt）=4.0 SPFT：pHIV⁃Luciferase（wt/wt）=4.0

A：Gel retardation experiments of naked DNA，PEI25k/pHIV⁃Luciferase and SPFT/pHIV⁃Luciferase at various mass ratios. B：Dynamic light scatter⁃
ing（DLS）analysis of SPFT/pHIV⁃Luciferase with plasmids at various mass ratios. C：DLS analysis of SPFT with different plasmids at various mass ra⁃
tios. D：SEM image of SPFT/pHIV⁃Luciferase（Scale bar=100 nm）. E：Stability analysis of SPFT/pHIV⁃Luciferase plasmid complexes. F：Analysis of the
ability of SPFT to protect the plasmid of pHIV⁃Luciferase. G：DLS analysis of SPFT/pHIV⁃Luciferase complexes in various solutions. H：PDI of SPFT/
**
*
pHIV⁃Luciferase complexes in various solutions. Values were presented as x ± sx （n=3）. P < 0.05 and P < 0.01.
图2 SPFT质粒复合体的表征
Figure 2 Characterization of SPFT with plasmids