Page 16 - 南京医科大学自然版

南京医科大学学报（自然科学版） 第44卷第8期
·1044 · Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） 2024年8月

·基础研究·

阿托伐他汀诱导的MIN6细胞铁死亡及相关机制研究

魏倩影，陈 欣，秦 瑶，李雨潇，秦 璐，张 梅 *
南京医科大学第一附属医院内分泌科，江苏 南京 210029

［摘 要］ 目的：探讨阿托伐他汀（atorvastatin，Ator）是否可诱导小鼠胰岛β细胞株 MIN6 细胞发生铁死亡，并探讨其可能的
作用机制。方法：将MIN6细胞分为对照组、Ator组、Ator+凋亡抑制剂（Z⁃VAD⁃FMK）组、Ator+坏死抑制剂（necrostatin⁃1，Nec⁃1）
组和 Ator+铁死亡抑制剂（ferrostatin⁃1，Fer⁃1）组。采用 CCK⁃8 法检测细胞活力；透射电镜观察细胞超微结构；荧光显微镜观
察活性氧（reactive oxygen species，ROS）和Fe 水平；酶联免疫吸附试验（enzyme⁃linked immuno sorbent assay，ELISA）检测丙二醛
2+
（malondialdehyde，MDA）和还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量；实时荧光定量PCR法（quantitative real⁃time PCR，RT⁃qPCR）
检测凋亡基因半胱氨酸蛋白酶3（caspase⁃3）、坏死基因受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3（receptor⁃interacting serine threonine kinase 3，
Ripk3）、铁死亡相关基因长链酯酰辅酶A合成酶4（acyl⁃coA synthetase long⁃chain family member 4，Acsl4）、前列腺素内过氧化物
合酶 2（prostaglandin⁃endoperoxide synthase 2，Ptgs2）和谷胱甘肽过氧化物酶 4（glutathione peroxidase 4，Gpx4）的 mRNA 表达水
平；Western blot检测4⁃羟基壬烯醛（4⁃hydroxynonenal，4⁃HNE）和GPX4的蛋白表达水平。结果：与Ator组相比，Ator+Z⁃VAD⁃FMK
组和Ator+Fer⁃1组细胞存活率更高（P均<0.01）。透射电镜下Ator组细胞可见凋亡、铁死亡和自噬相关的形态学特征。与对照组
相比，Ator 组细胞 Fe 相对荧光强度、MDA 水平和 ROS 相对水平均升高，GSH 含量下降；caspase⁃3、Acsl4、Ptgs2 的 mRNA 及
2+
4⁃HNE 的蛋白表达增加（P均<0.05），GPX4的mRNA和蛋白表达减少（P < 0.05）。与Ator组相比，Ator+Fer⁃1组 Fe 相对荧光强
2+
度、MDA 水平和 ROS 相对水平均下降，GSH 含量上升；Acsl4的 mRNA 表达减少，Gpx4 的 mRNA 表达增加（P均<0.05）；4⁃HNE
的蛋白表达减少而GPX4的蛋白表达增加，但差异无统计学意义。结论：Ator可能通过抑制甲羟戊酸途径下调GPX4表达，诱
导MIN6细胞发生铁死亡。
［关键词］ 阿托伐他汀；铁死亡；新发糖尿病；MIN6细胞
［中图分类号］ R587.1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2024）08⁃1044⁃07
doi：10.7655/NYDXBNSN240215

Study of atorvastatin induced ferroptosis in MIN6 cells and its related mechanisms

WEI Qianying，CHEN Xin，QIN Yao，LI Yuxiao，QIN Lu，ZHANG Mei *
Department of Endocrinology，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China

［Abstract］ Objective：To explore whether atorvastatin（Ator）can induce ferroptosis in pancreatic β⁃cell line MIN6 cells and its
possible mechanism. Methods：MIN6 cells were divided into control group，Ator group，Ator+apoptosis inhibitor（Z⁃VAD⁃FMK）group，
Ator+necrostatin⁃1（Nec⁃1）group and Ator+ferrostatin⁃1（Fer⁃1）group. Cell viability was detected by cell counting kit⁃8（CCK⁃8）
method. The ultrastructure of cells was observed by transmission electron microscopy. The levels of reactive oxygen species（ROS）and
Fe 2 + were observed by fluorescence microscopy. The contents of malondialdehyde（MDA）and glutathione（GSH）were detected by
enzyme⁃linked immunosorbent assay（ELISA）method. Real⁃time quantitative PCR was used to detect the mRNA levels of caspase⁃3，
receptor⁃interacting protein kinase 3（Ripk3），acyl⁃CoA synthetase long⁃chain family member 4（Acsl4），prostaglandin endoperoxidase
synthase 2（Ptgs2）and glutathione peroxidase 4（Gpx4）. Western blot was used to detect the proteins levels of 4⁃hydroxynonenal
（4⁃HNE）and GPX4. Results：Compared with the Ator group，cell viability of MIN6 was higher in Ator+Z⁃VAD⁃FMK group and Ator+
Fer⁃1 group（P < 0.01）. MIN6 cells，which were treated with Ator，exhibited the characteristic morphologic features associated with
apoptosis，ferroptosis and autophagy under transmission electron microscopy. Compared with the control group，the levels of the
2 +
intracellular Fe ，MDA and ROS in the Ator group were increased and GSH was decreased. The mRNA relative expression levels of

［基金项目］ 国家自然科学基金（81974103，82370828）
∗
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：zhangmei@njmu.edu.cn