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第44卷第8期 魏倩影，陈 欣，秦 瑶，等. 阿托伐他汀诱导的MIN6细胞铁死亡及相关机制研究［J］.
2024年8月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（8）：1044-1050 ·1045 ·

caspase⁃3，Acsl4 and Ptgs2 were increased，as well as the protein relative expression level of 4⁃HNE（all P < 0.05）. The mRNA and
protein relative expression levels of GPX4 were decreased（P < 0.05）. Compared with the Ator group，the levels of the intracellular
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Fe ，MDA and ROS in the Ator+Fer⁃1 group were decreased and GSH was increased. The mRNA relative expression level of Acsl4
was decreased and Gpx4 was increased（all P < 0.05）. The protein relative expression levels of 4⁃HNE was decreased and GPX4 was
increased，though the changes were not statistically significant. Conclusion：Atorvastatin may induce ferroptosis in MIN6 cells by down⁃
regulating GPX4 expression through inhibiting mevalonate pathway.
［Key words］ atorvastatin；ferroptosis；new⁃onset diabetes mellitus；MIN6 cell
［J Nanjing Med Univ，2024，44（08）：1044⁃1050］

他汀类药物是 3⁃羟基⁃3⁃甲基戊二酰辅酶 A 还 TRIzol 试剂盒（TaKaRa 公司，日本）；逆转录试剂盒
原酶抑制剂，通过抑制甲羟戊酸通路的限速酶降低 （HIScript Ⅲ All⁃in⁃one RT SuperMix 试剂盒）、荧光
胆固醇合成，被广泛用于预防心血管疾病 ［1-2］ 。尽管 定量 PCR 试剂盒（南京诺唯赞公司）；β肌动蛋
他汀类药物可有效降低心脑血管事件发生率，但越 白（β⁃actin）单克隆抗体（武汉 Proteintech 公司）；
来越多的证据表明，他汀类药物的使用可使新发糖 4⁃羟基壬烯醛（4⁃hydroxynonenal，4⁃HNE）单克隆抗
尿病（new⁃onset diabetes mellitus，NODM）的风险增 体（Thermo Scientific 公司，美国）；谷胱甘肽过氧化
加 10%~12% 。他汀类药物引起 NODM 的可能机 物酶 4（glutathione peroxidase 4，GPX4）单克隆抗体
［3］
制包括：诱导胰岛β细胞发生凋亡、坏死及自噬 ［4-6］ ， （武汉AB clonal公司）；二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，
减少胰岛素分泌，增加胰岛素抵抗以及干扰外周组 DMSO）（Sigma公司，美国）。
［7］
织摄取葡萄糖等 ，但其确切机制仍需进一步研究。 1.2 方法
铁死亡是一种由铁依赖的脂质过氧化物过度 1.2.1 细胞培养与分组
［8］
积累导致的新型程序性细胞死亡 。已有研究证 将细胞置于含 15%胎牛血清、1%青霉素⁃链霉
实他汀类药物可以诱导肿瘤细胞、肝星状细胞 素和 0.1% β⁃巯基乙醇的高糖培养基中，在 37 ℃、
（hepatic stellate cell，HSC）、脂肪细胞及肌细胞发生 5% CO2的恒温培养箱中培养，待细胞密度达 70%~
铁死亡 ［9-12］ 。本课题组前期研究发现棕榈酸可诱导 80%时进行后续操作。将 MIN6 细胞分为对照组
MIN6细胞发生铁死亡 ［13］ 。然而，他汀类药物能否会 （control）、Ator 组（Ator 25 μmol/L）、Ator+Fer⁃1 组
诱导胰岛β细胞发生铁死亡，参与 NODM 的发生尚 （Ator 25 μmol/L+Fer⁃1 5 μmol/L）、Ator+Z⁃VAD⁃
未见报道。 FMK 组（Ator 25 μmol/L+Z⁃VAD⁃FMK 10 μmol/L）、
Ator+Nec⁃1 组（Ator 25 μmol/L+Nec⁃1 10 μmol/L），
1 材料和方法
干预细胞48 h。
1.1 材料 1.2.2 CCK⁃8法检测细胞活力
小 鼠 胰 岛 β 细 胞 MIN6 细 胞 由 本 实 验 室 保 将细胞以2×10 个/孔接种至96孔板，按上述实
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存。DMEM 高糖培养基、胎牛血清、青霉素⁃链霉 验分组分别干预48 h后，按照CCK⁃8检测试剂盒操
素、β⁃巯基乙醇、胰酶（Gibco 公司，美国）；阿托伐他 作说明，每孔加入10 μL CCK⁃8溶液，37 ℃避光孵育
汀（atorvastatin，Ator）、铁死亡抑制剂（ferrostatin⁃1， 2 h。酶标仪测定每孔450 nm 处的吸光度并计算细
Fer⁃1）、凋亡抑制剂（Z⁃VAD⁃FMK）、坏死抑制剂 胞存活率。
（necrostatin⁃1，Nec⁃1）、CCK⁃8 试剂盒（MCE 公司，美 1.2.3 透射电子显微镜观察细胞超微结构
国）；活性氧（reactive oxygen species，ROS）荧光探 将细胞以1.3×10 个/孔接种至6孔板，按上述实
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针、丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒、还原型 验分组干预48 h收集细胞，加入2.5%戊二醛4 ℃固
谷胱甘肽（glutathione，GSH）检测试剂盒、蛋白裂解 定过夜，1%锇酸固定细胞2 h，乙醇梯度脱水后环氧
液、蛋白酶抑制剂 PMSF、BCA 蛋白浓度测定试剂 树脂包埋、超薄切片，3%醋酸铀、柠檬酸铅双重染
盒、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠二抗、辣根过 色，漂洗后透射电镜观察。
氧化物酶标记山羊抗兔二抗（上海碧云天公司）； 1.2.4 ROS测定
Fe 荧光探针（FerroOrange）（Dojindo 公司，日本）； 将细胞以1.3×10 个/孔接种至6孔板，按上述实
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