Page 31 - 南京医科大学学报自然科学版

第44卷第1期 季 拓，高玉芝，王 彦，等. 重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸条技术快速可视化检测嗜麦芽
2024年1月 窄食单胞菌方法的建立与应用［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（01）：024-031 · 25 ·

RPA⁃LFS were performed by detecting 108 clinical samples，comparing with qPCR and culture⁃biochemical method. Results：The RPA⁃
LFS detection method can complete the amplification process by reacting for 8 min under 37 ℃，and the results can be observed on the
LFS within 1 min. This method had high sensitivity and the limit of detection was 1.107 CFU/reaction. In addition，the RPA⁃LFS
method had high specificity and no cross⁃reaction with other pathogens. Compared with qPCR，the RPA⁃LFS method showed the same
accuracy. The results of RPA⁃LFS exhibited a high degree of consistency with the culture⁃biochemical method，with a kappa index of
0.972. Conclusion：This study has established a rapid and accurate RPA⁃LFS dectection method for identifying S. maltophilia，which
is independent of the precision instruments and the professional technician. The implementation of this method can provide valuable
information for timely formulation of appropriate reasonable antibacterial treatment plans，and shows promise in clinical application.
［Key words］ Stenotrophomonas maltophilia；recombinase polymerase amplification；lateral flow strip
［J Nanjing Med Univ，2024，44（01）：024⁃031］

嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia， 样本中的 SMA ，该方法虽然检测时间短、精度高，
［6］
S. maltophilia，SMA）是一种革兰阴性条件致病菌，广 但受限于精密仪器和专业技术人员，难以打破实验室
泛存在于自然和医院环境中，是医院获得性感染 的壁垒，无法实现现场即时检测（point of care testing，
的重要病原菌之一，位于临床分离的非发酵菌第 POCT）。因此，建立一种便捷、灵敏的检测方法，对
三位 ，环境或临床分离株表现出多种抗生素和抗 于快速诊断SMA至关重要。
［1］
［2］
逆性表型 。SMA危及免疫功能低下人群的生命安 重组聚合酶等温扩增技术（recombinase polymerase
［3］
全 ，最常见的临床表现是肺炎、菌血症、伤口感染 amplification，RPA）是一种不依赖于精密仪器、可在
［4］
和尿路感染 。目前，临床采用常规的生化培养法 37 ℃恒温、短时间内扩增目的基因的核酸扩增技
鉴定SMA耗时较久，易耽误治疗 。选择性培养基 术 ［7-8］ 。侧向流动试纸条（lateral flow strips，LFS）是
［1］
可以根据 SMA 的分泌物产生颜色反应，以达到从 以纳米胶体金颗粒（Au nanopartical，AuNP）作为信
［9］
［5］
混合菌株中鉴定SMA的目的 ，但该方法需要建立 号标签的纸基即时检测装置 。将 LFS 与 RPA 技
严格无菌的环境且周期较长。聚合酶链式反应 术联合使用，可突破仪器和专业技术人员的限制，
（polymerase chain reaction，PCR）技术已被用于检测 在较短时间内对扩增产物进行目视检测 ［10- 11］ 。
急性白血病或骨髓增生异常综合征化疗患者血液 RPA⁃LFS反应原理如图1所示。

FITC THF 3′Block
AuNP
RPA Probe 5′ 3′
Anti⁃FITC
Lateral flow strip
Reverse Primer 3′ 5′
Biotin Anti⁃Biotin
nfo nuclease Control linel
Test linel
Conjugate pad
Sample well
DNA amplicons
Secondary
antibody
RPA⁃LFS
图1 RPA⁃LFS反应原理
Figure 1 The principle of RPA⁃LFS

目前，RPA⁃LFS已经被成功用于肺炎链球菌 ［12］ 、
1 材料和方法
肺炎克雷伯菌 ［13］ 、白色念珠菌 ［14］ 等病原菌的分子诊
断 ［15］ 。而对于SMA，RPA⁃LFS 的检测方法还没有建 1.1 材料
立。本研究旨在建立一种改良的RPA⁃LFS技术，实 1.1.1 菌株来源
现对SMA的快速检测。 本研究所用的标准菌株列于表 1，均由连云港