Page 30 - 南京医科大学自然版

第44卷第9期
·1202 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年9月

A 质粒为代表检查GFP表达情况，发现其转染效率可
0 h 1 h 2 h 3 h 6 h 12 h
达 80%左右（图 3A）。之后，分别提取前述 GMC 中
KLF5 51 kDa
的蛋白质，用 WB 检查 KLF5 的过表达和沉默水平。
IL⁃23 19 kDa
结果证实，与 pIRES2⁃EGFP 转染组相比，pIRES2⁃
β⁃actin 42 kDa
KLF5转染细胞后能显著表达KLF5。shCTR+sublytic
B C5b⁃9 组的 KLF5 表达量显著高于 shCTR 组，而与
4 3 KLF5 ** ** ** ** shCTR+sublytic C5b⁃9组相比，shKLF5+sublytic C5b⁃9
IL⁃23
Relative protein level 2 1 * 组的 KLF5 表达则未见显著升高（图 3B~D），提示，
sublytic C5b⁃9刺激GMC能显著升高KLF5蛋白的表
达，而用shKLF5则可沉默KLF5基因的表达。

0 2.4 过 表 达 或 敲 低 KLF5 对 sublytic C5b ⁃ 9 刺 激
GMC诱导的IL⁃23表达的影响
0 h 1 h 2 h 3 h 6 h 12 h
将 pIRES2⁃EGFP 和 pIRES2⁃KLF5 质粒分别转
A：The protein levels of KLF5 and IL ⁃ 23 in rat GMC stimulated
with sublytic C5b⁃9 for 0，1，2，3，6 and 12 h were examined by WB. B： 染 GMC 48 h，或将 shCTR 和 shKLF5 质粒分别转染
*
Semi⁃quantitative analysis of WB. Compared with the 0 h group，P < GMC后48 h再给予sublytic C5b⁃9刺激6 h。提取细
**
0.05 and P < 0.01（n=3）. 胞的 mRNA 和蛋白，行 RT⁃qPCR 和 WB 实验。结果
图2 Sublytic C5b⁃9刺激GMC不同时间KLF5和IL⁃23蛋
表明，转染 pIRES2⁃KLF5 过表达质粒的 GMC，IL⁃23
白的表达
Figure 2 The expression levels of KLF5 and IL⁃23 protein mRNA 和 KLF5 及 IL⁃23 的蛋白水平均明显升高，而
in rat GMC stimulated by sublytic C5b⁃9 at dif⁃ 转染shKLF5质粒的GMC，其由sublytic C5b⁃9诱导的
ferent time IL⁃23 mRNA以及蛋白水平均显著低于shCTR+sublytic
C5b⁃9组（图4）。
2.3 KLF5 过表达或小干扰质粒转染 GMC 后 KLF5 2.5 Sublytic C5b⁃9 刺激和高低表达 KLF5 对 IL⁃23
的表达 启动子活性的影响
将 KLF5 过表达质粒（pIRES2⁃KLF5）和对照质 将 IL⁃23 全长启动子荧光素酶报告基因质粒
粒（pIRES2⁃EGFP）转染大鼠 GMC 48 h，或将 KLF5 （pGL3⁃IL⁃23⁃FL）转染GMC 48 h，再用sublytic C5b⁃9
小 干 扰 质 粒（shKLF5）及 对 照 质 粒（shCTR）转 染 刺激 GMC 6 h，或将 pGL3⁃IL⁃23⁃FL 质粒分别与
GMC 48 h 时再行 sublytic C5b⁃9 刺激 6 h。以 shCTR pIRES2⁃KLF5 或 shKLF5 质粒（包括各自的对照质

A GFP B C D 4
shKLF5+sublytic C5b⁃9
pIRES2⁃EGFP shCTR+sublytic C5b⁃9 protein level 3 ** ΔΔ
pIRES2⁃KLF5
KLF5 51 kDa shCTR 2 ##

β⁃actin 42 kDa KLF5 51 kDa Relative KLF5 1
White light β⁃actin 42 kDa 0
pIRES2⁃KLF5
shCTR
shCTR+sublytic C5b⁃9
pIRES2⁃EGFP shKLF5+sublytic C5b⁃9

A：Rat GMCs were transfected with shCTR plasmid for 48 h，and GFP expression showed that the transfection efficiency was up to 80%（×100，
scale bar=100 μm）. B-C：GMCs were transfected with pIRES2⁃KLF5 plasmid for 48 h（B）or shKLF5 plasmid for 48 h followed by sublytic C5b⁃9 stim⁃
ulation for 6 h（C），and the protein level of KLF5 was detected by WB. D：Semi⁃quantitative analysis of WB（figure 3 B and C）. Compared with the
##
ΔΔ
**
pIRES2⁃EGFP group，P < 0.01；compared with the shCTR group， P < 0.01；compared with the shCTR+sublytic C5b⁃9 group，P < 0.01（n=3）.
图3 GMC质粒转染效率以及KLF5过表达或小干扰质粒转染GMC后KLF5的表达
Figure 3 The efficiency of plasmid transfection into GMC and the expression of KLF5 in the GMC transfected with
pIRES2⁃KLF5 or shKLF5 plasmids