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第44卷第9期 刘 玉，应 帅，罗 灿，等. Sublytic C5b⁃9上调KLF5促进Thy⁃1肾炎大鼠肾小球系膜细胞
2024年9月 生成IL⁃23的作用［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（9）：1198-1206 ·1205 ·

A 动子活性 ［21-22］ 。为明确KLF5作为转录因子，其表达
LV⁃shKLF5+Thy⁃1N
LV⁃shCTR+Thy⁃1N 升高或降低能否影响 IL⁃23 的启动子活性，本研究
将大鼠 IL⁃23 全长启动子荧光素酶报告基因质粒
NS Thy⁃1N （pGL3⁃IL⁃23⁃FL）转染GMC，一方面，行sublytic C5b⁃9
KLF5 51 kDa
刺激，另一方面，将其与 KLF5 过表达质粒共转染
IL⁃23 19 kDa GMC。结果显示，无论是 sublytic C5b⁃9 刺激 GMC，
还是在GMC中过表达KLF5，其IL⁃23的启动子活性
β⁃actin 42 kDa
均见显著增加。此外，将shKLF5质粒与IL⁃23启动子
B
4 KLF5 ** ** ** ** 质粒共转染GMC，再行sublytic C5b⁃9刺激，其IL⁃23
IL⁃23
Relative protein level 3 2 ΔΔ ΔΔ 为 Thy⁃1N 致病始动因素，sublytic C5b⁃9 刺激 GMC
的启动子活性则未见明显升高。以上实验表明，作
后确能上调 IL⁃23基因的启动子活性，而KLF5过表
达与 sublytic C5b⁃9 刺激的效果基本一致。但当
1
KLF5 基因被沉默后，由 sublytic C5b⁃9 诱导 IL⁃23 启
0
LV⁃shKLF5+Thy⁃1N
LV⁃shCTR+Thy⁃1N 刺激 GMC 后上调的 KLF5 能促进 IL⁃23 基因的转录
NS Thy⁃1N 动子的活性则明显受到了抑制，提示 sublytic C5b⁃9

A：The protein levels of KLF5 and IL⁃23 in rat renal tissues of NS， 与表达。
尽管体外细胞学实验的结果影响因素相对简单，
Thy⁃1N，LV⁃shCTR+Thy⁃1N，and LV⁃shKLF5+Thy⁃1N groups were de⁃
且实验条件易于控制，但是体外实验的结果往往需要
tected by WB. B：Semi⁃quantitative analysis of WB. Compared with the
体内实验（如动物模型）加以验证 ［4，8-9］ 。本课题组
NS group，P < 0.01；compared with the LV⁃shCTR+Thy⁃ 1N group，
**
应 用 慢 病 毒 包 装 shKLF5 和 shCTR，在 体 外 选 定
ΔΔ
P < 0.01（n=3）.
图7 敲低KLF5表达后Thy⁃1N大鼠肾组织中IL⁃23蛋白表 LV⁃shCTR转染GMC的最佳浓度后，行大鼠肾动脉灌
达的变化 注术，将上述LV⁃shRNA分别导入大鼠的肾组织 ［9，21］ 。
Figure 7 The change of IL⁃23 protein expression in the 结果证实，不仅相应的 LV⁃shRNA 能有效地富集于
renal tissues of Thy⁃1N rats after KLF5 knock⁃ 大鼠的肾脏中，而且LV⁃shKLF5还能沉默肾组织中
down
的 KLF5 基因表达。与此同时，Thy⁃1N 大鼠肾组织
组织和受 sublytic C5b⁃9 刺激的 GMC 中，转录因子 中促炎因子IL⁃23的表达水平也相应降低。这一体
KLF5 和促炎因子 IL⁃23 的蛋白表达。结果表明，无 内实验再次确证，敲低大鼠肾组织中 KLF5 的表达
论是体内还是体外，其 KLF5 和 IL⁃23 的表达水平均 能明显抑制Thy⁃1N大鼠肾组织中IL⁃23的生成。
明显上升，且 KLF5 的表达时相还略早于 IL⁃23。已 综上所述，本研究发现，在 Thy⁃1N 大鼠发病早
知，KLF5是一种C端含有3个连续锌指结构DNA结 期，由 sublytic C5b⁃9 刺激 GMC 后诱导上调的 KLF5
合结构域的转录因子，其表达增加能调控下游靶基因 能促进 IL⁃23 基因的转录与表达。然而，Thy⁃1N 大
的转录 。为进一步探讨 Thy⁃1N 大鼠发病早期由 鼠肾组织早期发生炎症的机制较为复杂 ［4，8-9］ ，本研
［12］
sublytic C5b⁃9 刺激 GMC 后上调 KLF5 表达对 IL⁃23 究仅初探了 KLF5 表达升高对 sublytic C5b⁃9 刺激
生成的影响，本研究利用KLF5过表达质粒（pIRES2 GMC诱导促炎因子IL⁃23生成的影响，至于KLF5调
⁃KLF5）和发夹状小干扰 RNA 质粒（shKLF5）分别转 控 IL⁃23 表达的具体机制以及其他影响因素等，仍
染 GMC，检查 KLF5 和 IL⁃23 的表达。结果证实，过 需进一步探究。
表达KLF5蛋白后，GMC中IL⁃23的mRNA和蛋白水 ［参考文献］
平也明显升高。而 shKLF5 沉默 KLF5 基因后，由
［1］ FLOEGE J. A new alternative：inhibiting complement acti⁃
sublytic C5b⁃9 刺激 GMC 诱导的 IL⁃23 合成显著减
vation in patients with IgA nephropathy［J］. Kidney Int，
少。这一实验表明，KLF5 的表达水平影响 GMC 中
2024，105（1）：28-30
IL⁃23的合成。
［2］ SHEN F，LIU M J，PEI F，et al. Role of uromodulin and
一般情况下，转录因子调控靶基因表达的关键 complement activation in the progression of kidney dis⁃
在于其能与靶基因启动子结合，并提高靶基因的启 ease［J］. Oncol Lett，2021，22（6）：829