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第45卷第12期
·1758 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年12月
动物均在标准实验环境下饲养。大鼠胰腺外分泌 中线解剖，充分暴露腹腔，胸腔。迅速分离胰腺组
细胞即AR42J 细胞由本课题组常规保存，最初购买 织，用 RNA Later 冲洗并将胰腺组织分成 3 部分，第
自美国 ATCC。雨蛙素（Cerulein）、α ⁃酮戊二酸（al⁃ 一部分使用 4%多聚甲醛固定，后放置于 4 ℃冰箱
pha⁃ketoglutarate，αKG）、吲哚丙酸（indolepropionate， 中，剩余两部分立即分别放置于液氮罐中。细胞上
INDO）（上海源叶生物科技有限公司）；胎牛血清 清标本：6 孔板中细胞培养 24 h 后，留取培养液，离
（fetal bovine serum，FBS）、F12K 培 养 基（Thermo 心后留取上清液检测。
Fisher Scientific 公司，美国）；抗体：X 线修复交叉互 1.2.3 CCK⁃8细胞增殖检测
补3蛋白（X ray repair cross⁃complementing protein 3， 将 AR42J 细胞以 3×10 个/孔接种于 96 孔板，设
3
XRCC3）、β肌动蛋白（β⁃actin）以及HRP标记抗兔和 置空白对照（无细胞培养基）及实验组（αKG、INDO
抗小鼠二抗（Proteintech 公司，美国）；酶联免疫吸附 按预设梯度浓度处理），每组设3个复孔。37 ℃培养
测定（enzyme⁃linked immunosorbent assay，ELISA）试 24 h后，弃去原培养基，每孔加入含10% CCK⁃8试剂
剂盒：白细胞介素（interleukin，IL）⁃6、IL⁃1β、转化生 的无血清培养基100 μL，避光孵育2 h。使用酶标仪
长因子⁃β1（transforming growth factor β1，TGF⁃β1） 于450 nm波长测定吸光度值，根据吸光度值按公式
（北京欣博盛生物科技有限公司）；细胞计数试剂盒⁃ 计算细胞存活率。
8（cell counting kit⁃8，CCK⁃8）（MCE 公司，美国）；4% 1.2.4 炎症因子检测
多聚甲醛、BCA 蛋白定量试剂盒、RIPA 裂解液、 对细胞上清和血清分别进行炎症因子水平检
PMSF、QuickBlock 阻断缓冲液（上海碧云天生物 测，IL⁃6、IL⁃1β和TGF⁃β1水平根据制造商的说明书
TM
技术有限公司）；Lipofectamine 3000（Thermo Fisher 用ELISA试剂盒进行定量检测。
Scientific公司，美国）；TRIzol试剂、2×Taq Plus Master 1.2.5 苏木精⁃伊红染色法（hematoxylin⁃eosin stain⁃
Mix、HiScript Ⅱ Q Select RT SuperMix for qPCR（南 ing，HQE）和免疫组化染色（immunohistochemistry，
京诺唯赞生物科技有限公司）。 IHC）
1.2 方法 胰腺组织在 4%多聚甲醛中固定，然后包埋于
1.2.1 动物和细胞模型构建 石蜡块中，切成 4 μm 厚的切片，用于 HE 染色。免
C57BL/6小鼠（雄性，4周龄，体重25 g左右）适应 疫组化染色用于分析 XRCC3 在胰腺组织中的表
性饲养1周后，随机分为4组，每组10只。对照组：腹 达。包埋蜡块经脱蜡、水化、抗原修复等步骤后，用
腔注射等量生理盐水；αKG组：腹腔注射10 mg/kg的 XRCC3一抗孵育过夜，冲洗后与二抗在室温下孵育
αKG；AP组：造模时腹腔注射50 μg/kg雨蛙素，每小时 1 h。最后，加入二氨基联苯胺显色，苏木精反染
腹腔注射1次，共注射10次；AP+ INDO组：AP造模基 色。HQE 染色和 IHC 均通过 Case Viewer 软件进行
础上，最后1次追加腹腔注射INDO（50 mg/kg）。腹腔 扫描和观察。
注射的αKG和INDO的浓度参考既往已有的文献报 1.2.6 蛋白免疫印迹实验（Western blot，WB）
道 ［16-17］ 。动物实验符合3R原则，且已获得南京医科 胰腺组织在RIPA裂解缓冲液和PMSF中裂解，
大学实验动物福利伦理委员会动物实验伦理审查 随后将裂解物在4 ℃下以 12 000 r/ min离心15 min，
批准，伦理号为：IACUC⁃2507054。以AR42J细胞为 获得总蛋白上清液。测定蛋白浓度后煮沸变性电
基础构建体外模型，αKG 组：培养基中加入不同浓 泳，转移到PVDF膜上。用QuickBlock 阻断缓冲液
TM
度的αKG共培养；AP组：培养基中加入10 nmol/L雨 在室温下对膜进行 15 min 的封闭处理，然后在 4 ℃
蛙素共培养；INDO组：培养基中加入10 nmol/L雨蛙 下与一抗孵育过夜。第 2 天用 TBST 洗涤 PVDF 膜，
素和不同浓度INDO共培养。 在室温下用二抗孵育2 h，洗涤3次后行ECL化学发
1.2.2 标本留取 光试剂检测。
血液标本：实验小鼠造模成功后，第 1 次注射 1.2.7 XRCC3过表达质粒构建及转染
αKG或雨蛙素开始 24 h 后，经眼球摘除取血法，收 XRCC3 过表达质粒由上海吉凯基因公司设计
取血液于医用促凝管内，常温放置 30 min 后，4 ℃， 构建。将正处于对数增长阶段的 AR42J 细胞接种
5
3 000 r/min 离心 10 min，吸取上层血清分装于200 μL 至6孔板中，接种密度为2×10 个/孔，待次日细胞密
离心管内，标记后存储在-80 ℃冰箱。组织标本：小 度达到 70%~80%时使用 Lipo3000 按照说明书进行
鼠眼球采血完成后，经脱颈处死小鼠。沿胸腹部正 质粒转染，转染后 48 h，收集细胞并通过 WB 检测
