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第45卷第12期 侯超群，葛万里，彭云鹏，等. α⁃酮戊二酸通过XRCC3诱发急性胰腺炎发病的机制研究［J］.
2025年12月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（12）：1756-1765 ·1759 ·

XRCC3的表达水平。 和转录因子等更深入地挖掘和分析。
1.2.8 实 时 荧 光 定 量 PCR（quantitative real time 1.3 统计学方法
polymerase chain reaction，RT⁃qPCR） 本 MR 主要研究血清代谢物与 AP 的双向因果
按照 TRIzol 试剂使用说明书提取细胞总 RNA， 关 联 。 以 逆 方 差 加 权（inverse variance weighted，
用逆转录试剂盒（HiScript Ⅱ Q Select RT SuperMix IVW）法为主要方法评估不同SNP的因果效应；另用
for qPCR）将 RNA 反转录成 cDNA。采用 RT⁃qPCR 孟德尔随机化⁃Egger 回归（Mendelian randomization⁃
法，以β⁃actin 为内参基因检测 XRCC3 的 mRNA 水 Egger regression，MR⁃Egger）、加权中位数、简单模式

平。XRCC3上游引物序列：5′⁃GCTACCGAGTGCCT⁃ 及加权模式法验证IVW结果。其中 MR⁃Egger 法通
GAAGAA⁃3′；下游引物序列：5′⁃CAGCAGAATG⁃ 过加入截距项检测水平多效性。进一步使用 Co⁃
GAGTAGCCACA⁃3′；β⁃actin 上游引物序列：5′⁃ AG⁃ chran’s Q和MR⁃PRESSO 评估SNP间异质性并识别
ATGTGATCAGCAAGCAG⁃3′；下游引物序列：5′⁃GC⁃ 潜在异常SNP。所有统计分析在 R 3.6.3 中完成，使
GCAAGTTAGGTTTTGTCA⁃3′。 用TwoSampleMR 0.5.6 和 MR⁃PRESSO 1.0包。后续
1.2.9 转录组测序 验证实验中，结果以均值±标准差（x ± s）的形式呈
从每个胰腺样本的200 mg组织中提取RNA，对 现，采用 SPSS 20.0 统计软件进行统计学分析，两组
照组和αKG组的小鼠各取3个独立样本送至华大基 间比较采用t检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
因（深圳）进行 RNA 测序。随后按照制造商的方案
2 结 果
制备cDNA文库。构建好的文库在合格后进行质量
检测和测序。测序获得的数据称为原始读段或原 2.1 AP血清代谢物特征
始数据。经过质量控制后，将过滤后的干净读段与参 首先基于两轮独立的 MR 研究，在遗传层面探
考序列进行比对。比对完成后，通过统计比对率、读 索了血清代谢物与AP 发病间的因果关系。研究结
段在参考序列上的分布等，经过第2次质量控制（比 果显示，αKG、INDO等代谢物可能与AP间存在因果
对质量控制），对基因进行定量分析以及基于基因表 关系，而后基于两轮结果的 Meta 分析进一步表明，
达水平的各种分析（主要包括成分、相关性、差异基因 αKG 可能是该疾病的致病因素，而 INDO 则是保护
筛选等），并针对所选样本中差异表达的基因进行基 因素（表1、图1）。
因本体论（gene ontology，GO）功能显著性富集分析、 2.2 αKG抑制AR42J细胞活性
通路显著性富集分析、聚类、蛋白质相互作用网络 为进一步验证αKG、INDO 在 AP 发病过程所发

表1 与AP存在因果关系的血清代谢物（基于两轮独立MR分析）
Table 1 Serum metabolites causally associated with AP（based on two rounds of independent MR analyses）
Exposure Method NSNP β SE OR 95%CI P
αKG IVW 11 1.02 0.42 2.77 1.22-6.25 0.01
αKG IVW 11 1.07 0.46 2.92 1.18-7.26 0.02
bilirubin（E，E） * IVW 14 0.33 0.13 1.39 1.08-1.80 0.01
bilirubin（E，E） # IVW 08 0.37 0.18 1.45 1.02-2.06 0.04
bilirubin（Z，Z） * IVW 19 0.22 0.09 1.25 1.04-1.49 0.02
bilirubin（Z，Z） # IVW 09 0.34 0.13 1.40 1.08-1.83 0.01
*
biliverdin IVW 27 0.26 0.13 1.29 1.01-1.66 0.04
biliverdin # IVW 13 0.40 0.20 1.49 1.01-2.21 0.05
INDO IVW 16 -0.56 0.19 0.57 0.39-0.83 0.00
INDO IVW 14 -0.73 0.26 0.48 0.29-0.81 0.01
X⁃11530 * IVW 19 0.43 0.15 1.53 1.15-2.04 0.00
X⁃11530 # IVW 10 0.56 0.21 1.75 1.16-2.65 0.01
*
X⁃12329 IVW 25 0.06 0.03 1.06 1.00-1.12 0.03
X⁃12329 # IVW 24 0.09 0.04 1.09 1.01-1.18 0.03
*denotes the ebi⁃a⁃GCST90018789 dataset；#denotes the finn⁃b⁃K11_ACUTPANC dataset. IVW：inverse variance weighted；NSNP：number of
SNPs；Beta：Beta coefficient；SE：standard error；OR：odds ratio；95% CI：95% confidence interval.