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第45卷第4期 林俊杰，王 舒，赵小静，等. 双调蛋白通过上调LPA⁃LPAR3调控肠成纤维细胞活化促进克
2025年4月 罗恩病肠纤维化［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（4）：498-508 ·503 ·

用。首先，使用划痕实验来评估LPA对人肠成纤维 （图3C~E）。此外，LPA促进人肠成纤维细胞产生更
细胞迁移能力的影响，分别以不同浓度的LPA（0、5、 多的胶原蛋白 Col1a1、Col6a1 和 Col6a3（图 3F~H）。
10、20 μmol/L）处理人肠成纤维细胞，LPA显著提高 随后，通过Ki67免疫荧光染色来特异性检测增殖期
了划痕愈合的速度（图 3A、B）。同时，通过 Western 细胞，评估 LPA 对人肠成纤维细胞增殖能力的影
blot 评估了肠成纤维细胞活化标志物α⁃SMA 蛋白 响。LPA 处理组中 Ki67 阳性细胞占比明显高于对
的表达水平，发现 LPA 显著促进肠成纤维细胞中 照组（图 3I、J），以上结果提示 LPA 促进人肠成纤维
α⁃SMA 表达，在10 μmol/L 48 h条件下作用较为显著 细胞的迁移、增殖、活化以及胶原蛋白产生。

LPA ***
（μm 2 ） 600 000 * ***
A Control 5 μmol/L 10 μmol/L 20 μmol/L B 800 000
Migration area
0 h 400 000
72 μm 72 μm 72 μm 72 μm 200 000
0
Control
48 h 5 μmol/L 10 μmol/L 20 μmol/L
72 μm 72 μm 72 μm 72 μm
LPA
C LPA D *** E ***
Control 5 μmol/L 10 μmol/L 20 μmol/L 2.0 * *** 2.0 ***

α⁃SMA 42 kDa α⁃SMA expression 1.5 α⁃SMA expression 1.5
1.0
GAPDH 36 kDa 0.5 1.0
Relative 0
LPA 10 μmol/L 0.5
Control 24 h 48 h Control Relative 0
α⁃SMA 42 kDa 5 μmol/L 10 μmol/L 20 μmol/L Control 24 h 48 h
GAPDH 36 kDa LPA
F 3 * G 3 ** H 4 *
relative expression 1 1 1
Col1a1 2 Col6a1 relative expression 2 Col6a3 relative expression 3 2

0
Control LPA（10μmol/L） 0 Control LPA（10μmol/L） 0 Control LPA（10μmol/L）
Control LPA
I J 30 ***

DAPI/Ki67 Percentage of Ki67 positive cells 20

10

20 μm 20 μm 0 Control LPA（10μmol/L）
A，B：The migration ability of fibroblasts after treating with LPA was assessed by the wound healing assay（scale bar=72 μm，n=6）. C-E：The
expression of α⁃SMA in fibroblasts after treating with LPA was detected by Western blot（n=3）. F-H：The expression of Col1a1（F），Col6a1（G），
and Col6a3（H）of fibroblasts after treating with 10 μmol/L LPA was measured by qRT⁃PCR（n=3）. I，J：Fibroblasts were stained with Ki67 immunofluo⁃
*
**
***
rescence and the percentage of Ki67 positive cells was calculated（ki67：green；DAPI：blue；scale bar=20 μm，n=3）. P < 0.05，P < 0.01，and P < 0.001.
图3 LPA促进人肠成纤维细胞的迁移、活化和增殖
Figure 3 LPA promoted HIF migration，activation，and proliferation
为进一步验证LPA是否通过LPAR3发挥作用， 成纤维细胞迁移（图4A、B）、活化（图4C、D）、胶原蛋

在以 LPA 刺激人肠成纤维细胞的同时加入 LPAR3 白产生（图 4E~G）以及增殖（图 4H、I）的促进作用。
抑制剂 Ki16425。Ki16425 显著抑制了 LPA 对人肠 同时，通过转染 siRNA 敲减了肠成纤维细胞中的