Page 68 - 南京医科大学自然版

第45卷第4期
·504 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年4月

LPAR3表达（图5A），LPAR3的敲减显著减弱了LPA 达水平，以及 ELISA 评估细胞上清中的 LPA 含量，
介导的对人肠成纤维细胞迁移（图 5B、C）、活化（图 结果显示 AREG 促进人肠纤维细胞中的 ATX 的表
5D、E）、胶原蛋白产生（图5F~H）以及增殖（图5I、J） 达（图 6A、B），细胞上清中 LPA 水平增高（图 6C）。
的促进作用，这些结果表明LPA及其受体LPAR3在 进一步应用 LPA 刺激人肠成纤维细胞后，通过
CD相关肠纤维发生和发展中起着重要作用。 Western blot 检 测 细 胞 的 LPAR3 蛋 白 水 平 ，发 现
2.4 AREG 通过 LPA 上调人肠成纤维细胞 LPAR3 LPAR3 的表达明显增加（图 6D、E）。随后加入 ATX
的表达 抑制剂，发现 AREG 对肠成纤维细胞中 LPA 的分泌
ATX 是产生 LPA 的关键酶，具有溶血磷脂酶 D 作用明显减弱（图 6F）。同时也降低了人肠成纤维
的活性，介导溶血磷脂胆碱（lysophosphatidylcho⁃ 细胞中 LPAR3 的表达（图 6G~I）。综上所述，AREG
line，LPC）水解产生 LPA。以 AREG 刺激人肠成纤 可能通过促进人肠成纤维细胞 LPA 及其特异性受
维细胞后，通过 Western blot 检测细胞内 ATX 的表 体LPAR3的表达，从而参与肠纤维化的发生和发展，

A Control LPA LPA+Ki16425 B
（μm 2 ） 1 500 000 *** ***
Migration area 5 000 000
0 h 1 000 000
72 μm 72 μm 72 μm

48 h 0
Control LPA LPA+
Ki16425
72 μm 72 μm 72 μm
C D 1.5 *** ***

Control LPA LPA+Ki16425 α⁃SMA density 1.0

Relative 0
α⁃SMA 42 kDa 0.5
GAPDH 36 kDa Control LPA LPA+
Ki16425
E 6 *** *** F 4 ** * G 8 ** *
relative expression 2 relative expression 1 relative expression 2
Col1a1 4 Col6a1 3 2 Col6a3 6 4

0
Control LPA LPA+ 0 Control LPA LPA+ 0 Control LPA LPA+
Ki16425 Ki16425 Ki16425
H Control LPA LPA+Ki16425 I positive cells 25 ** **
20
DAPI/Ki67 Percentage of Ki67 15 5
10

0
Control LPA LPA+
72 μm 72 μm 72 μm
Ki16425
A，B：The migration ability of fibroblasts after treating with LPA with or without Ki16425 was assessed by the wound healing assay（scale bar=
72 μm，n=10）. C，D：The expression of α⁃SMA in fibroblasts after treating with LPA with or without Ki16425 was detected by Wester blot（n=3）.
E-G：The expression of Col1a1（E），Col6a1（F），and Col6a3（G）of fibroblasts after treating with LPA with or without Ki16425 was measured by qRT⁃
PCR（n=3）. H，I：Fibroblasts were stained with Ki67 immunofluorescence（H）and the percentage of Ki67 positive cells（I）was calculated（scale
*
**
bar=72 μm，n=3）. P < 0.05，P < 0.01，and *** P < 0.001.
图4 Ki16425减轻LPA对人肠成纤维细胞的运动、活化和增殖的促进作用
Figure 4 Ki16425 alleviated the promoting effects of LPA on the motility，activation，and proliferation of human intestinal
fibroblasts