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第45卷第8期
               ·1124 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2025年8月


              pharmacological targeting of the Tyro3⁃NF⁃κB axis may represent a novel therapeutic strategy for endotoxemia management.
             ［Key words］ Tyro3；endotoxemia；macrophages；inflammatory response；NF⁃κB
                                                                          ［J Nanjing Med Univ，2025，45（08）：1123⁃1131］





                  内毒素血症是由脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）            实验室提供（编号：007937），南京集萃药康生物科
              引起的过度免疫反应所导致的危及生命的临床综                             技有限公司代为繁育。C57BL/6小鼠购自南京医科
                  ［1］
              合征 ，是脓毒症的常见触发因素，被视为脓毒症的                           大学动物实验中心。所有实验操作均遵循《动物实
              亚型或早期阶段，目前仍缺乏有效的治疗手段 。                            验的伦理准则与指南》并获得南京医科大学伦理委
                                                         ［2］
              在脓毒症发病过程中，大量促炎细胞因子释放可                             员会审批（IACUC-2102028）。

              引发全身炎症反应综合征（systemic inflammatory                      LPS（Sigma 公司，美国），巨噬细胞集落刺激因
              response syndrome，SIRS）、多器官功能衰竭（multiple          子（macrophage colony stimulating factor，M ⁃ CSF）、
              organ failure，MOF），甚至死亡   ［3-4］ 。尽管近年来在脓          BCA Protein Assay Reagent Kit、蛋 白 S（protein S，
              毒症的病理机制研究方面取得了重要进展，但其复                            Pros1）（Thermo 公司，美国），小鼠肿瘤坏死因子α
              杂的分子调控机制仍未完全阐明，临床治疗策略仍                           （tumor necrosis factor⁃ α，TNF⁃ α）、白细胞介素⁃6
              面临巨大挑战 。                                         （interleukin⁃6，IL⁃6）ELISA试剂盒（杭州联科生物），
                          ［5］
                                                 ［6］
                  LPS是革兰阴性菌外膜的重要成分 ，在与Toll                      天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶（aspartate ⁃ transaminase，
              样受体 4（Toll⁃like receptor 4，TLR4）结合时触发炎            AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，
              症，激活多种信号通路，其中，核因子κB（nuclear                       ALT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）试剂
              factor kappa⁃B，NF⁃κB）信号通路作为炎症与免疫应                 盒（南京建成），胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、
              答的核心枢纽，通过调控多种促炎细胞因子、趋化                            RPMI 1640 培养基、青霉素⁃链霉素（Gibco 公司，美
              因子及黏附分子的表达，在机体防御系统中发挥关                            国），ECL 显影液（山东思科捷公司）。p⁃IKK 抗体、
              键作用 。这一信号通路在脓毒症发病过程中被过                            IKK 抗体、IκB⁃α抗体、p65 抗体（CST 公司，美国），
                    ［7］
              度激活，导致炎症介质的爆发性释放，进而诱发全                            p⁃p65 抗体（Santa 公司，美国），Tyro3 抗体（Novus
                        ［8］
              身炎症反应 。目前研究发现多种内源性负调控分                            公司，美国），GAPDH 抗体（武汉三鹰生物公司），
              子通过各自不同的分子机制共同维持 NF⁃κB 信号                         Anti⁃Mouse IgG⁃HRP、Anti⁃Rabit IgG⁃HRP（南京贝斯
                                                    ［9］
              活化的动态平衡，防止炎症反应的过度激活 。                             特生物公司），TRIzol（TaKaRa 公司，日本），逆转录
                  Tyro3 蛋白酪氨酸激酶作为 TAM（Tyro3、Axl、                试剂盒、RT⁃qPCR 试剂（南京诺唯赞公司），各种
              Mer）受体酪氨酸激酶家族的重要成员，不仅参与细                          RT⁃qPCR 引物序列由南京擎科生物公司合成。
              胞增殖、凋亡等生理过程，还在免疫调节中发挥关                            1.2  方法
              键作用   ［10-11］ 。然而，Tyro3是否可以通过调控巨噬细                1.2.1  实验模型
              胞NF⁃κB通路影响LPS诱导的急性炎症反应及肝脏                              本研究使用雄性小鼠以避免雌激素对内毒素
              损伤，目前尚无报道。本研究分析了脓毒症患者外                            血症小鼠生存和炎症的可能影响，选取 8 周龄
              周血 Tyro3 的表达改变；并利用 Tyro3 和 Tyro3 小                C57BL/6 小鼠（Tyro3 ）作为野生型对照组，Tyro3             -/-
                                                        -/-
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                                                +/+
              鼠构建 LPS 诱导的内毒素血症模型，结合体外巨噬                         小鼠作为敲除型对照组，8周龄雄性Tyro3 、Tyro3                 -/-
                                                                                                      +/+
              细胞实验，系统探讨了 Tyro3 对内毒素血症的作用                        小 鼠 腹 腔 注 射 LPS（10 mg/kg）12 h 后 通 过 吸 入
              及其调控巨噬细胞 NF⁃κB 炎症通路的分子机制。                         CO2 实 施 安 乐 死 用 于 分 析 炎 症 表 型 ；腹 腔 注 射
              这些发现不仅确立了Tyro3在先天免疫中的关键调                          LPS（10 mg/kg）96 h后，计算小鼠生存率。
              控作用，更为靶向 Tyro3⁃NF⁃κB 轴治疗内毒素血症                          提取 Tyro3 和 Tyro3 小鼠的骨髓源性巨噬细
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              及相关炎症性疾病提供了新的治疗策略。                                胞（bone marrow⁃derived macrophage，BMDM），LPS刺
                                                                激0、15、30 min后收取蛋白用于炎症通路分析。
              1 材料和方法
                                                                1.2.2 临床评分

              1.1  材料                                                小鼠在LPS注射后0、6、12 h以双盲法方式进行
                  实验所使用的Tyro3基因敲除小鼠由美国Jackson                   临床评分。在指定的时间点，通过对结膜炎、粪便、
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