Page 20 - 《南京医科大学学报（自然科学版）》2025年第9期

第45卷第9期
·1232 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年9月

A HCC827 HCC827/OR B C 40
（μmol/L） 8 7 6 30 ***

×100 5 4 3 Relative expression of cirrc⁃3633 20
IC50 of osimertinib 0.09 10 **

0.06
H1975 H1975/OR 0.03 0 0
HCC827 H1975 H1975 HCC827
H1975/OR
HCC827/OR
H1975/OR
HCC827/OR
×100

A：Morphology of drug⁃resistant cells and sensitive cells. B：IC50 of drug⁃resistant cells was elevated compared with that of sensitive cells. C：qRT⁃
**
PCR verification that circ_0003633 was significantly highly expressed in drug⁃resistant cell lines. P < 0.01 and *** P < 0.001（n=3）.
图1 circ_0003633在耐药细胞中高表达
Figure 1 circ_0003633 is highly expressed in drug⁃resistant cells

证 circ_0003633 环形结构的发散和收敛引物，仅在 证实了circ_0003633含有circRNA结构，比线性亲本
cDNA中成功扩增，而发散引物在gDNA无法检测到 基因 RYK 具有更强的抵抗 RNase R 外切酶的作用
相应的条带，证实了 circ_0003633 的环状结构（图 （图2C）。此外，通过核质分离实验（图2D）和FISH实
2B）。同时，使用RNase R外切酶消化细胞的RNA也 验（图2E）检测了circ_0003633的亚细胞定位。结果

A
Species Gene Isoform Location Strand FPM Exon Start⁃ExonEnd Seq Type Cell Line Conservation
_
Human RYK ENST00000460933 Chr3：133894452- - 0.095 7-13 Ribo Liver_N22 N.A.
（hg19） 133914026
position
organism （genome strand circRNA ID genomic spliced samples scores repeats annotation best gene circRNA
transcript
length
length
symbol
study
browser link）
hsa chr3：133894452⁃ - hsa_circ_0003633 19 574 796 Hs68_control，Hs68_RNase，WAS2， 11，164，3，0， None ANNOTATED， NM_001005861 RYK Jeck2013，
133914026 cerebellum，diencephalon， 38，65，74，25， CDS，coding， Maass2017，
frontal_cortex，occipital_lobe， 25，5，11，7，15， INTERNAL， Rybak2015，
parietal_lobe，temporal_lobe，549， 23，14，26，NA， OVCODE， Salzman2013
Ag04450，Bj，Gm12878，H1hesc，Helas3， 3，5，4，8 OVEXON
Hepg2，Huvec，K562，Nhek，Nhlf，Sknshra
B Marker cDNA cDNAgDNA D HCC827/OR H1975/OR
200 bp 1.5 Nucleus 1.5 Nucleus
Relative RNA level 0.9 Relative RNA level 0.9
100 bp 1.2 Cytoplasm 1.2 Cytoplasm
C Mock 0.6 0.6
1.5 RNase R+ HCC827/OR 0.3 0.3
H1975/OR
Relative RNA level 1.0 ** ** E GAPDH circ_0003633 circ_0003633 circ_0003633
0.0
0.0
GAPDH
U6
U6
liner⁃RYK
liner⁃RYK
0.5
Merge
DAPI
0
circ_0003633
circ_0003633 liner⁃RYK liner⁃RYK H1975/OR
A：Basic information of circ_0003633. B，C：Gel electrophoresis and RNase R verification of the circular structure of circ_000363. D，E：Nuclear⁃
**
cytoplasmic separation experiment and FISH detection of circ_0003633 cell localization. P < 0.01（n=3）.
图2 验证circ_0003633的环状结构及亚细胞定位
Figure 2 Verify the ring structure and subcellular localization of circ_0003633