Page 45 - 南京医科大学自然版

第46卷第5期 徐明星，黄 婵，宁蓓蓓，等. tRF⁃AsnGTT⁃33减轻阿霉素肾病小鼠足细胞损伤的机制研究［J］.
2026年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（5）：664-672 ·667 ·

表1 引物序列 AsnGTT⁃33 NC mimics共同转染，转染48 h后依据双荧
Table 1 Primer sequences 光素酶报告基因实验说明书测定相对荧光素酶活性。
Gene Primer sequence（5′→3′） 1.3 统计学方法
β⁃actin F：CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC 实验数据使用 GraphPad Prism 8 进行数据分
R：ATGGAGCCACCGATCCACA
析。两组间比较采用非配对 t 检验，多组间比较
nephrin F：ATGGGAGCTAAGGAAGCCACA
采用单因素方差分析，P < 0.05 为差异有统计学
R：GATGGAGAGGATTACGCTGGG
意义。
podocin F：GCATCAAGCCCTCTGGATTAG
R：AGACGGAGATCAACCTTGTGATA 结 果
2
RAB21 F：ACGCCATTAGAGGGAGGA
R：CGAGAGAAAGTCCCAGAATGAA 2.1 tRF⁃AsnGTT⁃33 在 ADR 肾病小鼠肾组织中表
达显著下调
PAGE电泳（160 V、50 min）、转膜（400 mA、40 min）、 与 Control 组相比，ADR 组小鼠 Scr 和 BUN 水平
5%脱脂牛奶常温封闭2 h，置于兔源nephrin、podocin、 显著升高（图 1A、B）；HE 和 PAS 染色显示，Control
RAB21 一抗稀释液中 4 ℃过夜（1∶2 000），TBST 洗 组、ADR 组肾小管损伤评分分别为（0.63±0.25）分、
3 次，每次5 min，放入羊抗兔二抗稀释液（1∶10 000） （2.63±0.27）分，ADR 组肾小管损伤更显著（P <
中，室温孵育1 h后TBST洗膜，ECL曝光液充分浸润 0.01，表 2），ADR 组小鼠肾组织表现为肾小球系膜
后凝胶成像仪显影。ImageJ 软件计算灰度值，以 基质和细胞数量增加，伴有肾小管扩张、肾小管变
GAPDH为内参计算目的蛋白表达量。 性、肾小管蛋白管型（图 1C）；RT⁃qPCR 和 Western
1.2.9 双荧光素酶报告基因实验 blot 结果显示，与 Control 组相比，ADR 组中 Nephrin
分别构建野生型RAB21（WT⁃RAB21）和突变型 和 Podocin 的 mRNA 与蛋白表达量显著下降（图
RAB21（MUT ⁃ RAB21）质 粒 载 体 ，将 WT ⁃ RAB21、 1D~F）；此外，tRF⁃AsnGTT⁃33在ADR肾病小鼠肾组
MUT⁃RAB21 分别与 tRF⁃AsnGTT⁃33 mimics、tRF⁃ 织中表达显著下调（图1G）。

A *** B C Control ADR
（μmol/L） 200 （μmol/L） 25 ***
20
150
15
100
Scr 50 BUN 10 5 HE
0 0
Control ADR Control ADR 50 μm 50 μm

PAS

50 μm 50 μm
D E F G
1.5 Control Nephrin Control ADR 110 kDa 1.5 Control 1.5
Relative mRNA expression 1.0 *** *** GAPDH 42 kDa Relative protein level 1.0 *** ** tRF⁃AsnGTT⁃33/U6 1.0 ***
ADR
ADR
Podocin
0.5
0.5
0.5
37 kDa
0 0 0
Nephrin Podocin Nephrin Podocin Control ADR
A：Scr levels in ADR⁃induced nephropathy mice. B：BUN levels in ADR⁃induced nephropathy mice. C：Representative renal histopathology（HE
and PAS staining，scale bar=50 μm）in ADR⁃induced nephropathy mice. D：Relative mRNA expression levels of Nephrin and Podocin in renal tissues.
E，F：Representative Western blot bands and relative protein expression levels of Nephrin and Podocin. G：Expression level of tRF⁃AsnGTT⁃33 in renal
**
tissues of ADR⁃induced nephropathy mice. Compared with the control group，P < 0.01 and *** P < 0.001（n=5）.
图1 tRF⁃AsnGTT⁃33在ADR肾病小鼠肾组织中的表达
Figure 1 tRF⁃AsnGTT⁃33 expression in renal tissue of ADR nephropathy mice