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第46卷第5期        徐明星，黄     婵，宁蓓蓓，等. tRF⁃AsnGTT⁃33减轻阿霉素肾病小鼠足细胞损伤的机制研究［J］.
                  2026年5月                     南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（5）：664-672                         ·665 ·


                intratubular protein casts，and interstitial fibrosis. Overexpression of tRF ⁃ AsnGTT ⁃ 33 significantly lowered Scr and BUN levels，
                alleviated pathological damage，and upregulated the expression of nephrin and podocin. In ADR⁃induced podocytes，tRF⁃AsnGTT⁃33
                expression was decreased，along with reduced nephrin and podocin expression；these effects were reversed by tRF ⁃ AsnGTT ⁃ 33
                overexpression. Furthermore，tRF ⁃ AsnGTT ⁃ 33 overexpression led to a significant downregulation of RAB21 expression in both
                podocytes and mouse renal tissues. Conclusion：tRF⁃AsnGTT⁃33 may alleviate ADR⁃induced podocyte injury by targeting RAB21，
                providing a theoretical foundation for identifying novel therapeutic targets for chronic kidney disease.
               ［Key words］ adriamycin nephropathy；podocyte；apoptosis；tRF⁃AsnGTT⁃33；RAB21
                                                                              ［J Nanjing Med Univ，2026，46（05）：664⁃672］





                    慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）已成           霉素溶液（HyClone公司，美国）；RPMI1640培养基、胰
                为威胁人类健康的全球性重大公共卫生问题，其发                            酶（含EDTA）（Gibco公司，美国）；ADR、Lipofectamine
                病率高、并发症多、死亡率高，且近些年有年轻化趋                           2000转染试剂（Med Chem Express公司，美国）；血清
                势，目前尚无有效根治手段 。研究表明，蛋白尿是                           肌酐（serum creatinine，Scr）及血尿素氮（blood urine
                                        ［1］
                影响CKD进展的独立危险因素 。足细胞损伤与蛋                           nitrogen，BUN）定量试剂盒（南京建成生物公司）；
                                           ［2］
                                  ［3］
                白尿的产生密切相关 。由于足细胞的修复和再生                            CCK⁃8试剂盒、双荧光素酶测定试剂盒（上海碧云天
                能力有限，其损伤程度是影响CKD预后的主要决定                           生物公司）；tRF⁃AsnGTT⁃33腺相关病毒（adeno⁃asso⁃
                因素 ［4-5］ 。因此，研究足细胞损伤的分子机制对诊治                      ciated virus，AAV）和阴性对照（negative control，NC）
                CKD及改善患者预后具有重要意义。                                （上海吉凯基因有限公司）；tRF⁃AsnGTT⁃33 mimic及
                    转运RNA（transfer RNA，tRNA）衍生片段（tRNA⁃            NC（广州锐博生物科技有限公司）；γ干扰素（interferon γ，
                derived RNA fragment，tRF）是一类从成熟 tRNA 或            IFN⁃γ）（PeproTech公司，美国）；Trizol试剂（Invitrogen
                tRNA前体经特定核酸酶（如 Dicer、ANG 等）切割所                    公司，美国）；逆转录试剂盒、PCR试剂盒、RIPA裂解
                产生的短链非编码 RNA，长度通常为 14~30 个核                       液、蛋白酶抑制剂PMSF及BCA定量试剂盒（南京诺
                   ［6］
                苷酸 。研究表明，tRF在细胞应激、蛋白质翻译、细                         唯赞生物科技有限公司）；PCR引物由南京锐真生物
                胞增殖、DNA 损伤调节和表观遗传修饰调节等方面                          技术有限公司设计合成并验证；RAB21质粒和空载
                有着重要作用     ［7-11］ 。在疾病诊疗领域，tRF在肿瘤性疾              （vector）（南京科瑞斯生物公司）；GAPDH、nephrin、
                病、神经退行性疾病、心血管疾病等多种人类疾病中                           podocin抗体（Affinity公司，美国）；RAB21抗体（湖南
                展现出巨大的临床应用潜力。然而，tRF在肾脏领域                          艾方生物科技有限公司）；羊抗兔二抗（武汉Abbkine
                中的功能探索仍处于起步阶段。                                    生物技术有限公司）。
                    本课题组前期应用阿霉素（adriamycin，ADR）诱                  1.2  方法
                导足细胞损伤模型，通过高通量测序技术筛选出                             1.2.1 动物实验
                203条差异表达的tRF，其中101条上调，102条下调，                         20 只雄性 SPF 级 BALB/c 小鼠（雄性，8 周，22~
                基因本体（Gene Ontology，GO）和京都基因与基因组                   25 g）购自南京医科大学动物实验中心生产部，于南
                百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，     京医科大学实验动物屏障环境内饲养，正常进食与
                KEGG）通路分析提示这些差异表达的tRF参与了众                         活动，温度保持在 20~26 ℃、湿度保持在40%~70%，
                多与足细胞损伤相关的信号通路，如Ras 信号通路、                         每隔 12 h 昼夜交替。适应性喂养 2 周后，随机分为
                                                ［12］
                Wnt 信号通路、PI3K⁃Akt 信号通路等 。其中，tRF⁃                  4 组（n=5）：① Control 组，PBS 尾静脉一次性注入；
                AsnGTT⁃33表达下调最为显著，因此本研究探讨其在                       ②ADR 组，10 mg/kg ADR 尾静脉一次性注入              ［8］ ；
                ADR肾病足细胞损伤中的作用和分子机制，以期为开                          ③ADR+tRF⁃NC 组，10 mg/kg ADR 尾静脉一次性注
                发以tRF为靶点的CKD精准治疗策略提供理论基础。                         入，2 h 后注射 tRF⁃AsnGTT⁃33 NC AAV 50 nmoL；
                                                                  ④ADR+tRF⁃AAV组，10 mg/kg ADR尾静脉一次性注
                1  材料和方法
                                                                  入，2 h后注射tRF⁃AsnGTT⁃33 AAV 50 nmoL。2 周后
                1.1  材料                                           处死小鼠，收集血清及保存肾脏备用。动物实验已
                    胎牛血清（WISENT 公司，加拿大）；青霉素⁃链                     获得南京医科大学实验动物伦理委员会批准（伦理
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