Page 46 - 南京医科大学自然版
P. 46

第46卷第6期
               ·828  ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2026年6月


              功能。结果显示,miR⁃125a 或miR⁃150 过表达可显                    氧 诱 导 的 PASMC 增 殖 标 志 物 PCNA 蛋 白 ,促 进
              著抑制PASMC迁移和增殖(图5A~D)。Western blot                  PASMC 收缩表型标志物α⁃SMA、Calponin1 表达(图
              实验分析显示,过表达miR⁃125a 或miR⁃150抑制低                     5E、F)。

              A                          Normoxia                                  Hypoxia
                           NC        miR⁃125a mimic  miR⁃150 mimic     NC        miR⁃125a mimic  miR⁃150 mimic


                    h
                    0



                    h
                    24
                                                                                                      1 000 μm

                 ● NC
              B                          C                                            D   ● NC
                   miR⁃125a mimic  P<0.001                                                 ■  miR⁃125a mimic  P<0.001
                  ■
                 ▲ miR⁃150 mimic                  NC       miR⁃125a mimic  miR⁃150 mimic  ▲ miR⁃150 mimic
                              P<0.001                                                                  P<0.001
                         P<0.001                                                                  P<0.001
                   30                                                                       40
                      P<0.001              Normoxia                                        (%)  P<0.001
                  (%)  20  P<0.001  ▲  ▲                                                    30  P<0.001     ▲  ▲ ▲  ▲ ▲
                  Migration rate  10  ▲  ▲  ▲  ▲  Hypoxia                                  EdU positive cells  20  ▲  ▲  ▲  ▲ ▲
                                                                                            10
                                                                                 400 μm
                    0                                                                        0
                      Normoxia  Hypoxia                                                        Normoxia  Hypoxia

              E            Normoxia     Hypoxia    F
                          miR⁃125a mimic  miR⁃125a mimic  ● NC            ● NC             ● NC
                                        miR⁃150 mimic
                             miR⁃150 mimic
                                                                           miR⁃125a mimic
                                                      miR⁃125a mimic
                                                                                             miR⁃125a mimic
                                                     ■
                                                                           ■
                                                                                            ■
                       NC         NC                ▲ miR⁃150 mimic       ▲ miR⁃150 mimic  ▲ miR⁃150 mimic  P=0.005
                                                         P<0.001                                       P=0.005
                α⁃SMA                  -42 kDa    2.0                  3.0   P=0.006        2.0   P=0.001
                                                      P<0.001
                                                             P<0.001
                Tubulin                                                    P<0.001
                                       -55 kDa    1.5  P=0.003 ▲ ▲  P<0.001                 1.5  P<0.001
                                                  a⁃SMA/Tubulin  1.0  ▲  Calponin1/Tubulin  ▲  P=0.005  PCNA/Tubulin  1.0  ▲
                                                          ▲
              Calponin1                -32 kDa                   ▲ ▲   2.0 P<0.001 ▲  P=0.005   P<0.002    ▲ ▲
                                                                               ▲
                Tubulin                -55 kDa    0.5                  1.0            ▲ ▲ ▲         ▲ ▲ ▲
                 PCNA                  -36 kDa                                              0.5
                                                   0                    0                     0
                Tubulin                -55 kDa        Normoxia  Hypoxia    Normoxia  Hypoxia    Normoxia  Hypoxia
                  A,B:Representative images(A)and quantification(B)of wound⁃healing assay in PASMC transfected with miR⁃125a,miR⁃150 mimic,or negative
              control(NC),followed by exposure to normoxia or hypoxia for 24 h. Scale bar=1 000 μm. C,D:Representative images(C)and quantification(D)of EdU
              (red)staining in PASMC transfected with miR⁃125a,miR⁃150 mimic or NC,followed by hypoxia or normoxia exposure. Scale bar=400 μm. E,F:Repre⁃
              sentative immunoblots(E)and relative densitometric analysis(F)of α⁃SMA,Calponin1,and PCNA protein levels in PASMC(n=3).
                                          图5   miR⁃125a和miR⁃150抑制PASMC迁移和增殖
                            Figure 5  miR⁃125a and miR⁃150 suppressed the migration and proliferation of PASMC


              2.6  miR⁃125a 与 miR⁃150 调控 SMOC2 抑制 PASMC         (图6A、B)以及EdU实验(图6C、D)结果显示,SMOC2
              迁移和增殖                                              重 组 蛋 白 可 部 分 逆 转 miR ⁃ 125a 与 miR ⁃ 150 对
                   为 进 一 步 阐 明 miR ⁃ 125a 和 miR ⁃ 150 抑 制        PASMC 迁移和增殖的抑制作用。进一步 Western
              PASMC 表型转换依赖 SMOC2,利用 SMOC2 重组蛋                    blot 实验分析显示,SMOC2 重组蛋白部分逆转 miR⁃
              白处理PASMC,检测其表型转换的情况。划痕实验                           125a 和 miR⁃150 过表达介导的 PASMC 增殖标志物
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