Page 10 - 南京医科大学自然版

第46卷第7期
·956 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年7月

200 μL细胞悬液（已转染质粒48 h的细胞），细胞密 的表达情况，结果发现，HOXB4 的表达随胶质瘤级
度为 1.2×10 个/mL，再给予 DMSO 或 SP600125 处理 别增加而递增（P < 0.001，图 1A），且在胶质瘤Ⅱ、
5
细胞 12 h，之后弃去细胞培养基，PBS 洗涤 3 次。然 Ⅲ、Ⅳ级总体人群中，HOXB4 高表达患者的生存期
后将Transwell小室放入600 μL甲醇中固定30 min， 短于低表达患者（图 1B）。提示 HOXB4 基因的表
用 PBS 轻轻洗涤 3 次，接着用 600 μL 新鲜配制的结 达上调不仅与胶质瘤分级呈现正相关性，还与其
晶紫染液染色 10 min，PBS 轻轻洗涤 3 次。轻柔擦 Ⅱ~Ⅳ级总体人群的预后相关。接着，在3种胶质瘤
去 Transwell 小室上方的细胞，放置于通风橱干燥， 细胞系（U251、U373、U87）中检测 HOXB4 的 mRNA
最后在正置显微镜下观察Transwell 小室下方细胞， 和蛋白表达量。RT⁃PCR 和 Western blot 结果显示，
从每个样本中随机选取 5 个视野进行图像采集，利 这 3 种细胞系均表达 HOXB4 的 mRNA（图 1C、D）和
用Image J软件分别计算各视野内细胞数量，再计算 蛋白（图1E、F），以U87细胞最为明显。
5个视野的平均值。 2.2 过表达HOXB4基因促进胶质瘤细胞的增殖和

1.3 统计学方法 侵袭
使用GraphPad Prism 8.0软件进行分析，所有实 为了检测 HOXB4 基因对胶质瘤细胞增殖和侵
验进行3次独立重复，数据以均数±标准误（x ± sx ）表 袭的影响，将pIRES2⁃EGFP、pIRES2⁃HOXB4质粒分
示。两组间比较采用配对 t 检验，多组间比较采用 别转染U87和U251细胞。转染后48 h，通过荧光显
单因素方差分析，Bonferroni 法进行组间两两比较， 微镜观察绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，
P < 0.05为差异具有统计学意义。 GFP）的表达情况（图 2A）。接着，用 RT⁃PCR 和
Western blot 检测 HOXB4 基因的表达水平。结果显
2 结 果
示，与pIRES2⁃EGFP转染组比较，pIRES2⁃HOXB4转
2.1 胶质瘤患者肿瘤组织和细胞系中HOXB4的表 染组 HOXB4 的 mRNA（图 2B、C）和蛋白（图 2D、E）
达情况 水平均明显升高。此外，通过CCK⁃8和Transwell 观
通过 CGGA 数据库分析胶质瘤组织中 HOXB4 察细胞的增殖和侵袭，发现 pIRES2⁃HOXB4 转染组

A B 1.00 High expression（n=112）
3 ANOVA，P<0.001 0.75 Low expression（n=110）
Gene expression of HOXB4 2 1 Survival probability 0.50 P<0.001

0.25

0
0 0 1 000 2 000 3 000 4 000 5 000
WHOⅡ WHOⅢ WHO Ⅳ Time（d）
C D 5 ** E F 5 **

U251 U373 U87 mRNA levels 4 3 U251 U373 U87 protein levels 4 3
Relative HOXB4 1 0 Relative HOXB4 1 0
HOXB4 163 bp 2 * HOXB4 34 kDa 2 *
GAPDH 496 bp β⁃actin 42 kDa

U251 U373 U87
U251 U373 U87
A：The expression level of HOXB4 in cancer tissues from glioma patients at WHO grades Ⅱ-Ⅳ was analyzed by the CCGA database. B：The
CCGA database was used to show the correlation between HOXB4 expression and the prognosis of glioma patients. C，D：RT⁃PCR was performed to
detect the mRNA expression levels of HOXB4 in three glioma cell lines. E，F：Western blot assay was conducted to determine the protein expression
**
*
levels of HOXB4 in three glioma cell lines. Compared with the U251 group，P < 0.05，P < 0.01（n=3）.
图1 胶质瘤组织和细胞中HOXB4的表达情况
Figure 1 HOXB4 expression in glioma tissue and cell lines