Page 125 - 南京医科大学自然科学版第1期

第41卷第1期 许立生，王 水，赵志泓，等. VEGF和p53在三阴性乳腺癌患者组织和血清中表达及预后研究［J］.
2021年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（01）：118-121 ·119 ·

结果，其中0~2分为阴性（-），≥3分阳性。 表1 VEGF和p53蛋白在三阴性和非三阴性乳腺癌组织中
1.2.2 荧光定量PCR检测 的表达 ［n（%）］
取患者空腹肘静脉血 5 mL，3 000 r/min 离心 分组 VEGF阳性 p53阳性
三阴性乳腺癌（n=80） 38（47.50） 46（57.50）
10 min，收 集 血 清 。 采 用 TRIzol 试 剂 盒（Thermo
非三阴性乳腺癌（n=310） 93（30.00） 102（32.90）
Fisher 公司，美国）提取血清中的 RNA。根据 Prime⁃
χ 值 8.730 16.338
2
Script 逆转录酶试剂盒说明书进行反转录，反应体
TM
P值 0.003 ＜0.001
系为 20 μL，反应条件：30 ℃ 10 min，42 ℃ 30 min，
95 ℃ 5 min，反应产物即为cDNA，于-20 ℃保存。采 VEGF p53
用 All⁃in⁃One qPCR MixRT⁃PCR 试剂盒说明书进行
定量 PCR 检测，反应体系 25 μL。反应条件：95 ℃
预变性 5 min，95 ℃ 退火 30 s，60 ℃延伸 30 s，40 个

循 环 。 VEGF 上 游 引 物 5′ ⁃ GCACCCATG⁃ 三阴性乳腺癌
GCAGAAGGAGGAG⁃3′，下游引物 5′⁃GTGCTGAC⁃
GCGCTAACTGACC⁃3′；p53 上游引物 5′⁃ATGGAG⁃
GAGCCGCAGTCAG ⁃ 3′ ，下 游 引 物 5′ ⁃ TCAGTCT⁃
GAGTCAGGCCCTTC⁃3′；GAPDH 为内参，上游引物
5′⁃CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA⁃3′，下游引物
5′⁃ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA⁃3′。PCR 扩增
完成后，根据扩增曲线读取循环数（Ct），将 GAPDH 非三阴性乳腺癌
作为内参基因，采用相对定量法以 2 -ΔΔCt 对血清中
VEGF和p53表达水平进行相对定量分析。
1.2.3 随访
图 1 VEGF、p53 在三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌中的
术后对所有患者进行随访，末次随访截至2019年
表达（SP，×200）
9月。记录患者的3年生存情况。
1.3 统计学方法 相关性分析表明，血清 VEGF mRNA 水平与组织
采用 SPSS 15.0 软件，计数资料表示为例数（百 VEGF 表达水平、p53 mRNA 水平与组织 p53 表达水
分率），VEGF 和 p53 表达水平与患者临床病理因素 平 均 具 有 显 著 正 相 关 关 系（r=0.717、0.743，P <
相关性使用χ 检验和Fisher’s 精确概率法分析。计 0.05）。此外，血清中 VEGF mRNA 和 p53 mRNA 水
2
量资料以均数±标准差（x ± s）表示，两组间比较采用 平、组织VEGF 和p53 蛋白表达水平均呈正相关（r=
独立样本t检验。采用Pearson相关分析进行相关性 0.524，r=0.624，P < 0.05）。
检验。生存曲线采用 Kaplan⁃Meier 法。P < 0.05 为 2.2 VEGF和p53表达与病理特征的关系
差异具有统计学意义。 VEGF 和 p53 蛋白在三阴性乳腺癌组织中的表
达均与TNM分期、组织学分级和淋巴结是否转移有
2 结 果
显著关系（P < 0.05），与年龄、肿瘤直径均无显著关
2.1 VEGF和p53的表达 系（P＞0.05，表2）。
三阴性乳腺癌组织中 VEGF 和 p53 蛋白表达阳 2.3 乳腺癌的预后因素分析
性率分别为 47.50%（38/80）和 57.50%（46/80），明显 生存分析显示，VEGF 阳性的 3 年生存率比
高于非三阴性乳腺癌组织的 30.00%（93/310）和 VEGF 阴性者低，p53阳性的乳腺癌患者3年生存率
32.90%（102/310），两组比较，差异均具有统计学意 比p53阴性者低。Log⁃rank（Mantel⁃Cox）检测差异均
义（P < 0.05，表1）。典型病理图片见图1。 具有统计学意义（P < 0.05，图2、3）。因此，VEGF和
三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌患者血清 p53的表达可以作为乳腺癌的预后因子。
VEGF mRNA 水平分别为 4.12±1.76 和 3.02±1.51，
3 讨 论
p53 mRNA 水平分别为4.98±1.29和2.62±1.02，差异
有统计学意义（t=5.608、17.418，P < 0.001）。Pearson 三阴性乳腺癌作为乳腺癌的一种特殊类型，临