Page 49 - 南京医科大学自然科学版第1期

第41卷第1期 许传先，凌卫明，张岳春，等. 姜黄素对冈田酸损伤的HT⁃22细胞的保护作用［J］.
2021年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（01）：041-048 · 43 ·

显微镜和流式细胞仪检测各组细胞ROS生成水平。 20 nmol/L OA
1.2.6 免疫印迹法检测蛋白表达 40 nmol/L OA
60 nmol/L OA
HT⁃22 细胞分组处理后，收集各组细胞，采用 （ % of control） 150 80 nmol/L OA
100
100 nmol/L OA
BCA 法进行蛋白质含量测定。等量蛋白经 SDS⁃
PAGE电泳分离后，转移到PVDF 膜上。用封闭液封 细胞活力 50
闭60 min，分别加入Bcl⁃2、Cleaved⁃caspase⁃3、t⁃Tau、
0
p⁃Tau和β⁃actin抗体，4 ℃作用过夜，然后用TBST 清洗 0 12 24 48
时间（h）
10 min 3次，加入二抗室温孵育90 min，再用TBST清 图1 冈田酸对HT⁃22细胞活力的影响（n=3）
洗10 min 3次。ECL发光液将PVDF膜显色，凝胶成像 Figure 1 Effect of OA on viability of HT⁃22 cells（n=3）
系统扫描分析结果，Image J软件分析条带灰度值。

1.3 统计学方法 2.1.2 OA对HT⁃22细胞凋亡的影响
采用 GraphPad Prism7.0 进行统计学分析，实验 流式细胞仪检测细胞凋亡实验结果显示，与对
结果以均数±标准差（x ± s）表示，多组实验数据比较 照组相比，不同浓度的OA分别作用HT⁃22细胞24 h

采用方差分析，任意两组间比较用LSD⁃t检验。P < 后，OA 组细胞凋亡率明显升高，呈浓度依赖性，差
0.05表示差异有统计学意义。 异有统计学意义（图 2）。说明 OA 促进 HT⁃22 细胞
的凋亡，其IC50接近80 nmol/L。
2 结 果
2.1.3 OA对HT⁃22细胞ROS生成水平的影响
2.1 OA对HT⁃22细胞的作用 流式细胞仪检测结果显示，与对照组相比，不
2.1.1 OA对HT⁃22细胞活力的影响 同浓度的 OA（40、60、80 nmol/L）分别作用 HT⁃22 细
MTT 结果显示，与对照组相比，不同浓度的 OA 胞24 h后，OA组细胞内ROS生成水平随OA浓度的
（20、40、60、80、100 nmol/L）分别作用 HT⁃22 细胞 增高而增高（图 3）。说明 OA 的损伤造成 HT⁃22 细
12、24、48 h 后，细胞活力随 OA 浓度和作用时间的 胞内ROS水平增高。
增加而逐渐降低。OA 对 HT⁃22 细胞活力的抑制作 2.1.4 OA作用HT⁃22细胞后Bcl⁃2、Cleaved⁃caspase
用具有浓度和时间依赖性，差异有统计学意义（图 ⁃3、t⁃Tau、p⁃Tau蛋白表达量的变化
1）。说明 OA 对 HT⁃22 细胞活力有抑制作用，OA 作 Western blot 蛋白实验结果显示，不同浓度的
用HT⁃22细胞的IC50接近80 nmol/L。 OA（20、40、80 nmol/L）作用HT⁃22细胞48 h后，与对

A B
对照组 20 nmol/L 40 nmol/L 80
5 0.089% 0.025% 10 5 0.085% 0.024% 10 5 0.066% 0.00% （ % ） 60 * *
10
Comp⁃PE⁃A：PE⁃A ： 10 4 3 Comp⁃PE⁃A：PE⁃A ： 10 4 3 Comp⁃PE⁃A：PE⁃A ： 10 4 3 凋亡率 40 * *

10
10
10
20
2
2
2
10
0
10
10
对照组 20
40 60 80 100
9.05%
0 90.8%
27.7%
10.0%
0 72.2%
0 89.9%
OA（nmol/L）
0 10 2 10 3 10 4 10 5 0 10 2 10 3 10 4 10 5 0 10 2 10 3 10 4 10 5
Comp FITC⁃A：：FITC⁃A Comp FITC⁃A：：FITC⁃A Comp FITC⁃A：：FITC⁃A
60 nmol/L 80 nmol/L 100 nmol/L
5 0.064% 0.00% 10 5 0.066% 0.531% 10 5 0.076% 0.038%
10
Comp⁃PE⁃A：PE⁃A ： 10 4 3 2 Comp⁃PE⁃A：PE⁃A ： 10 4 3 2 Comp⁃PE⁃A：PE⁃A ： 10 4 3 2
10
10
10
10
10
10
0 65.2%
4
4
4
10
0 10
10
10
0 10 2 10 3 10 34.7% 5 0 50.4% 2 10 3 10 49.9% 5 0 46.8% 2 10 3 10 53.1% 5
0 10
Comp FITC⁃A：：FITC⁃A Comp FITC⁃A：：FITC⁃A Comp FITC⁃A：：FITC⁃A
A：流式细胞仪检测细胞凋亡实验结果；B：凋亡率定量分析。与对照组比较，P < 0.001（n=3）。
*
图2 OA对HT⁃22细胞凋亡的影响
Figure 2 Effect of OA on HT⁃22 cells apoptosis