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第41卷第10期 张 凤，林 敏，高 皋，等. 染色体核型分析和AZF检测在男性不育中的应用［J］.
2021年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（10）：1536-1541 ·1537 ·

（广州达晖生物技术股份有限公司）中，置于 37 ℃饱 PCR 扩增反应条件：第一阶段 50 ℃ 2 min；第
和湿度培养箱中培养 68~72 h。培养终止前在培养 二阶段 95 ℃ 5 min；第三阶段 95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，
基中加入浓度为 20 μg/mL 的秋水仙素 2~3 滴（1 mL 72 ℃ 30 s，38 个循环；第四阶段 72 ℃ 5 min。在第
针头垂直滴加），使最终浓度为 0.04~0.08 μg/mL， 三阶段的 60 ℃ 时收集 FAM/VIC/ROX/Cy5 信号，并
37 ℃培养箱继续培养 2.5 h 后收获细胞。正常进行 保存相关文件。当 FAM 通道结果为典型的Ｓ型扩
染色体制片及 G 显带进行染色体核型分析，每例样 增曲线且CT＜32，进行结果判读。否则实验失败。
本计数 30 个中期分裂相，分析计数 5 个细胞核型，
2 结 果
对于异常染色体核型分析计数100个中期分裂相。
1.2.3 AZF微缺失检测 2.1 染色体核型分析
DNA 的提取按照血液基因柱式小量提取试剂 1 899例检出225例异常染色体核型，异常率为
盒说明书进行，-20 ℃保存。AZF 微缺失检测试剂 11.85%。其中数目异常 100 例（44.44%），结构异常
盒由上海透景生命科技股份有限公司提供。采用 76 例（33.78%），嵌合体 10 例（4.44%），多态性 18 例
两管多重 PCR 扩增，4 个通道荧光检测的方法，判 （8.00%）；46，XX性发育异常21例（9.33%）。异常染
断 AZFa 区（sY84、sY86）、AZFb 区（sY127、sY134） 色体核型具体分布见表 1。225 例异常染色体核型
和 AZFc 区（sY254、sY255）的 3 个区域 6 个序列标 病例临床表现为无精子症的有 156 例（69.33%），少
签位点（STS）的微缺失，同时设置 2 个内对照基因： 精子症的有 69 例（30.67%）。异常核型占比最多的
男性性别决定基因（SRY）和编码锌指蛋白基因 是 47，XXY，共检出 94 例，占 41.78%；其次为 46，XX
（ZFY）。 核型，检出21例，占9.33%。

表1 异常染色体核型分布
临床表现（n） 异常核型
染色体异常核型类型 例数
NOA 少精子症 构成比（%）
数目异常（合计） 100 091 09 44.44

47，XXY 092 089 03 40.89
47，XXY，inv（9）（p12q21） 001 001 00 00.44
47，XXY，inv（6）（p21q25） 001 001 00 00.44
47，XYY 004 000 04 01.78
47，XY，+mar 002 000 02 00.89
结构异常（合计） 076 026 50 33.78
45，XY，rob（13；14） 014 001 13 06.22
45，XY，rob（13；15） 001 000 01 00.44
45，XY，rob（13；22） 001 000 01 00.44
45，XY，rob（14；21） 001 000 01 00.44
46，XY，inv（9）（p12q13） 016 006 10 07.11
46，X，i（Yq） 001 001 00 00.44
46，XY，t（6；15；21）（q15；q11；p11） 001 000 01 00.44
46，XY，t（1；10）（q22；p14） 001 001 00 00.44
46，X ，der（Y）（q10q10） 001 001 00 00.44
46，XY ，t（4；15）（q31；q13） 001 001 00 00.44
46，XY ，t（14；19）（p10；p10） 001 000 01 00.44
46，XY ，t（2；15）（p11；q26） 001 000 01 00.44
46，XY ，t（9；16）（p10；q10） 001 001 00 00.44
46，XY，t（14；17）（q32；q21） 001 001 00 00.44
46，XY，t（1；19）（q21；p13） 001 000 01 00.44
46，XY，t（1；21）（p31；q22），inv（1）（p13q21） 001 001 00 00.44
46，XY，t（4；17）（q27；q23） 001 000 01 00.44
46，XY，inv（5）（p15q13） 001 000 01 00.44