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第41卷第10期 马 玲，刘太香，薛 敏. 采用熔解曲线法进行RHD c.1227G>A基因检测研究［J］.
2021年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（10）：1542-1545 ·1545 ·

高效率结合多种靶序列，产生多个可区分的熔点峰； 基因检测的熔解曲线分析方法，该方法简单直接，
由于该方法需要2种荧光标记探针，检测成本较高。 可以高效、快速地进行RHD c.1227G>A等位基因检
荧光染料熔解曲线法无需探针设计，操作简单 测，在RhD阴性孕妇筛查中具有较大的应用价值。
且成本较低，因而本研究优先考虑采用此方法。根 ［参考文献］
据 RHD c.1227G>A 基因位点设计并合成序列特异
［1］ 李 丽. 76例Rh阴性孕妇妊娠结局分析［J］. 南京医科
性引物，β⁃actin作为内参，单一扩增目的基因，选用
大学学报（自然科学版），2012，32（10）：1439-1441
SYBR Green Ⅰ染料法。SYBR Green Ⅰ为非饱和型 ［2］ OKUBO Y，YAMAGUCHI H，TOMITA T，et al. A D vari⁃
荧光染料，非特异性与双链DNA结合，操作简单，性 ant，Del?［J］. Transfusion，1984，24（6）：542
价比高；虽然精准度较饱和染料稍低，但完全满足本 ［3］ HASEKURA H，OTA M，ITO S，et al. Flow cytometric
实验要求。本次共对87例标本进行检测，其中16例 studies of the D antigen of various Rh phenotypes with
含有RHD c.1227G>A等位基因，与商品化RHD阴性 particular reference to Du and Del［J］. Transfusion，1990，
30（3）：236-238
鉴定基因检测试剂盒（PCR⁃SSP 法）结果一致，RHD
［4］ KWON D H，SANDLER S G，FLEGEL W A. DEL pheno⁃
c.1227G>A阳性率为18.4%；熔解曲线方法的灵敏度
type［J］. Immunohematology，2017，33（3）：125-132
及特异度均为100%。
［5］ XU W，ZHU M，WANG B L，et al. Prospective evaluation
王霓等 ［13］ 建立了 RHD c.1227G>A 荧光染料熔
of a transfusion policy of RhD⁃Positive red blood cells in⁃
解曲线分型方法，设计 2 条特异性引物和 1 条通用 to DEL patients in China［J］. Transfus Med Hemother，
引物，产物RHD 1227A和RHD 1227G的熔解曲线分 2015，42（1）：15-21
别为75 ℃和77 ℃，根据结果可鉴别出RHD 1227A /G 、 ［6］ SHAO C P，XU H，XU Q，et al. Antenatal Rh prophylaxis
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1227A /G 、1227A /G 及 1227A /G 4 种基因型。不 is unnecessary for“Asia type”DEL women［J］. Transfus
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Clin Biol，2010，17（4）：260-264
过 该 方 法 仅 能 分 析 Del 型 标 本 是 否 存 在 RHD
［7］ 陈秉宇，谢一唯，沈 健. Del 血型鉴定实验标准操作规
1227G 和 1227A 位点，对于 RHD 1227A /G 的标本
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程［M］//桂嵘. 输血相容性检测及疑难病例分析. 北京：
无法得知其是RHD 1227A/1227A，还是RHD1227A/d，
人民卫生出版社，2018：312-314
同样也无法区分 RHD 1227G/1227G 和 1227G/d，若
［8］ CHAN K C，DING C，GEROVASSILI A，et al. Hyper⁃meth⁃
需进行区分，还需进一步RHD合子型检测。本研究
ylated RASSF1A in maternal plasma：a universal fetal
建立的方法与之相比，目的不同，因而研究手段更 DNA marker that improves the reliability of noninvasive
为简单直接。本研究旨在检测出是否存在 RHD prenatal diagnosis［J］. Clin Chem，2006，52（12）：2211-
c.1227G>A 等位基因，而并不关注 RHD 1227G 的存 2218
在与否。由于 RHD c.1227G>A 是亚洲型 DEL 血型 ［9］ YAN L，WU J，ZHU F，et al. Molecular basis of D variants
的分子遗传背景，其 RhD 抗原表位没有发生变化， in Chinese persons［J］. Transfusion，2007，47（3）：471-
该基因型个体是否会对RhD抗原免疫产生抗D抗体 477
［10］ SHAO C P，MAAS J H，SU Y Q，et al. Molecular back⁃
［5］
值得研究。Xu 等 研究发现，808 例 RhD 阴性孕妇
ground of Rh D⁃positive，D⁃negative，D（el）and weak D
中，178 例为 DEL 型，其中 94%存在 c.1227G>A 突
phenotypes in Chinese［J］. Vox Sang，2002，83（2）：156-
［6］
变，均未产生抗 D 抗体。Shao 等 也同样发现，199 161
例RhD阴性孕妇中，22.1%为DEL型，均为c.1227G> ［11］ WANG M，WANG B L，XU W，et al. Anti⁃D alloimmuni⁃
A突变且未产生抗D抗体。因此提议，该Del型孕妇 sation in pregnant women with DEL phenotype in China
可以免去孕期频繁的抗体筛查和抗D免疫球蛋白注 ［J］. Transfus Med，2015，25（3）：163-169
射。因此本研究目的在于对 RhD 初筛阴性的孕妇 ［12］ SUN C F，LIU J P，CHEN D P，et al. Use of real time PCR
进行RHD c.1227G>A检测，该位点检出意味着为亚 for rapid detection of Del phenotype in Taiwan［J］. Ann
Clin Lab Sci，2008，38（3）：258-263
洲型DEL，因此不会产生抗D抗体，无论样本是纯合
［13］王 霓，周世航，邵林楠，等. 熔解曲线分析法用于
子、杂合子，或者合并其他RHD变异型情况，该等位
RHD 1227G>A 基因分型的实验研究［J］. 中国输血杂
基因的检出具有重要指向意义。
志，2018，31（9）：953-956
综上所述，本研究建立了一种 RHD c.1227G>A ［收稿日期］ 2021-04-29