Page 102 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第11期
               ·1664 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年11月


              期1 495个，行 PGT 助孕的 PGT⁃FET 共 103 个周期。              23 对染色体，能检测到 4 Mb 以上片段微缺失/微重
              103 个 PGT⁃FET 周期中 56 个周期为 PGT⁃A，33 个周             复。筛选出正常的、可移植的胚胎，择期行胚胎移植。
              期为胚胎植入前染色体结构重排检测（preimplanta⁃                     1.2.4 子宫内膜的准备、胚胎移植
              tion genetic testing for structural rearrangements，PGT⁃  入组患者均采用激素替代周期方案进行内膜
              SR），14 个周期为胚胎植入前单基因病遗传学检测                         准备，服药 14~20 d，根据患者内膜情况及性激素水
             （preimplantation genetic testing for monogenic dis⁃  平肌肉注射黄体酮注射液（浙江仙琚制药）60 mg/d
              ease，PGT⁃M），均采用二代测序法进行全染色体拷贝                      进行内膜转化，转化 6 d 后安排解冻囊胚移植。移
              数变异（copy number variant，CNV）分析，以筛选整倍              植后 14 d 检测血清 hCG，hCG＞200 mU/mL 为生化
              体囊胚进行移植。排除了非高龄（＜35岁）、生殖道                          妊娠，移植后28~30 d经阴道超声检查见妊娠囊者为
              畸形、子宫腺肌症、子宫内膜异位症患者。所有患                            临床妊娠。妊娠12周前发生的自然流产定义为早期
              者签署知情同意书，其中进入临床PGT周期的患者                           自然流产，其余孕周＜28周或胎儿体重＜1 000 g的
              均额外签署了PGT知情同意书。                                   流产为晚期流产。按期随访至胎儿出生，记录胎儿

              1.2  方法                                           出生数量及情况。
              1.2.1 治疗方案                                        1.3  统计学方法
                  本中心采用常规的控制性促排卵方案，监测患                               使用 SPSS 22.0 对数据进行整理和统计分析。
              者外周血清性激素变化情况，同时阴道超声监测卵                            计量资料以均数±标准差（x ± s）表示，采用 Kolmogo⁃
              泡发育情况，当有 2 个卵泡直径≥18 mm 时，注射人                      rov⁃Smirnov test 对各组数据的进行正态性检验，符
              绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，            合正态分布的采用独立样本t检验，不符合正态分布
              hCG）5 000~10 000 U，36 h后行阴道超声介导取卵。                则用Mann⁃Whitney U检验进行连续变量数据的两组
              1.2.2 体外受精、胚胎培养和囊胚活检                              间比较。分类变量数据则采用卡方检验或Fisher精
                  取卵术中取出的成熟MⅡ卵母细胞行卵胞浆内                          确检验。PSM过程设定卡钳值为0.05，对患者基础特
              单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI），     征（女方年龄、转化日子宫内膜厚度＜8 mm或≥8 mm、
              ICSI 术后 16~18 h 进行原核观察，以受精卵出现双                    移植第 5 天或第 6 天囊胚）3 个因素采用 1∶2 随机匹
              原核即 2PN 为正常受精。在 ICSI 注射后第 3 天，使                   配法进行匹配。P＜0.05 为差异有统计学意义。
              用激光在卵裂期胚胎透明带切 1 个 10 μm 的孔径。
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              囊胚的评分由2位高年资胚胎学家依据Gardner囊胚
              评分标准进行评估         ［7-8］ 。使用5期和6期囊胚用于活              2.1  PGT⁃FET 周期与常规 FET 周期的人群特征及
              检，用内径20 μm的活检针从孵出的囊胚滋养层中吸                         临床结局比较
              取5~10个细胞后，采用激光辅助切割。取下的细胞                               比较 PGT⁃FET 组 103 个周期和常规 FET 组的
              用磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered saline，PBS）洗          1 495个周期的人群特征及临床结局。结果显示，两
              涤后，转移至0.2 mL PCR管于-80 ℃冰箱储存。活检                    组间的女方年龄、男方年龄等基线资料差异无统计
              后的囊胚立即进行玻璃化冷冻，储存于液氮中。                             学意义，周期数据提示两组移植前子宫内膜厚度无
                  未行PGT检测的患者，在授精后第3天，选择2枚                       显著差异。但PGT⁃FET组与常规FET组第5天囊胚
              优质胚胎进行冷冻。剩余胚胎的细胞数≥4 个且未                           （D5）占总体移植胚胎（D5+D6）的比例差异有统计
              发育停滞，在原核期未观察到多核现象，则继续行                            学意义。在此基础上，分析两组FET 后的临床妊娠
              囊胚培养，依据 Gardner 囊胚评分标准，4 期、5 期和                   结局。结果显示，PGT⁃FET 组患者早期自然流产率
              6 期囊胚为可冷冻的囊胚。                                     显 著 低 于 常 规 FET 组（11.11% vs. 25.31% ，P＜

              1.2.3  全基因组扩增和基于二代测序的染色体                          0.05），PGT⁃FET 组活产率显著高于常规 FET 组
              CNV分析                                             （43.69% vs. 33.04%，P＜0.05），两组间的生化妊娠
                  活检取出的滋养层细胞采用REPLI⁃g单细胞扩                       率、临床妊娠率、晚期自然流产率、多胎分娩率差异
              增试剂盒（Qiagen 公司，德国）或用 Sureplex 单细胞                 均无统计学意义。
              扩增试剂盒（Illumina 公司，美国）进行全基因组扩                           本研究调整女方年龄、子宫内膜厚度和移植胚
              增，构建 DNA 文库，采用 MiSeq 测序仪（Illumina 公               胎天数（D5/D6）等混杂因素对临床妊娠结局的潜在
              司，美国）进行 DNA 高通量测序           ［9-10］ ，检测范围涵盖        影响，在两组之间进行了 1∶2 的 PSM，随机筛选出
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