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第41卷第11期            史晓青，王 珏，丁 颖，等. 102例乳腺癌同源重组修复相关胚系基因突变研究［J］.
                 2021年11月                    南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（11）：1600-1606                      ·1601 ·


                pair，HRR）作为一种DNA损伤修复机制维持了人类                       供体和受体位点）经杂交捕获法建库并由 Qubit
                                                         ［3］
                基因组的完整性并确保遗传信息高保真传递 ，这                           （Thermo Fisher 公司，美国）及 Bioanalyzer（Agilent 公
                一过程涉及一大类与 DNA 同源重组修复相关的基                          司，美国）检测合格后，通过高通量测序仪Miseq（Il⁃
                因，若这些基因发生突变，DNA 损伤得不到及时和                          lumina 公司，美国）进行二代测序检测，其中文库构
                正确的修复，则会导致细胞功能障碍甚至肿瘤的发                            建所使用的人多基因突变检测试剂盒（广州燃石公
                生，称同源重组修复缺陷（homologous recombination              司）共 检 测 21 个 HRR 通 路 基 因 ，包 括 BRCA1、
                deficiency，HRD） 。除经典的 BRCA1/2、TP53 外，             BRCA2、PTEN、ATR、EMSY、FAM175A、FANCA、
                               ［4］
                HRR 相关基因还包括 ATM、BRIP1、CDH1、CHEK2、                 FANCI、NBN、MRE11A、ATM、BRIP1、CHEK1、
                                               ［5］
                NBN、PALB2、RAD51C、RAD51D 等 ，并与乳腺癌、                 CHEK2、 PALB2、 RAD50、 BARD1、 RAD51B、
                                                        ［6］
                卵巢癌，胰腺癌及前列腺癌等多种癌症相关 。目                            RAD51C、RAD51D 和 RAD51L。检测出变异基因的
                前认为，乳腺癌相关基因表达的变化远早于形态学                            分 类 参 考 了 ClinVar（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/
                    ［7］
                变化 。特征性基因表达谱的检测能在观察到肿瘤                            clinvar/）、BIC（https：//research.nhgri.nih.gov/bic/）、
                形态变化之前对个体罹患肿瘤的风险进行评估 ，                            ENIGMA（http：//enigma.ini.usc.edu/）等数据库；根据
                                                           ［8］
                且越来越多的证据表明           ［9-11］ ，与 HRR 相关基因突变         2015 版ACMG指南将基因变异的致病性分为5类 ：
                                                                                                             ［12］
                有关的肿瘤对铂类化疗药及核糖聚合酶（poly ADP⁃                       致病⁃5类、可能致病⁃4类、意义未明⁃3类、可能良性⁃
                ribose polymerase，PARP）抑制剂敏感，这对有遗传                2类、良性⁃1类。本研究将3~5类变异归入突变组。
                性乳腺癌高危因素的患者来说具有重要意义。                              1.3 统计学方法
                    本研究以二代测序为技术基础，检测了 102 例                           使用 SPSS25.0 软件对收集的数据进行统计分
                患者的 HRR 相关的 21 个胚系基因的变异情况，并                       析。连续变量用均数±标准差（x ± s）描述；成组设计
                分析其突变状态与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结状                            的两个率比较时，总数＞40且任意理论频数＞5时，
                态、病理类型及家族史等临床特征之间的相关性，                            用χ 检验；总数＞40且1＜任意理论频数≤5时，用校
                                                                     2
                旨在为遗传性乳腺癌的预防、诊断和治疗提供一定                            正χ 检验；总数≤40或任意理论频数≤1时，用Fisher
                                                                     2
                参考。                                               精确概率法检验；连续型变量如年龄使用 t 检验。
                                                                  P＜0.05为差异有统计学意义。
                1  对象和方法
                                                                  2  结 果
                1.1  对象
                    本研究为单中心回顾性研究，对2018年7月—                        2.1  研究对象整体特征
                2020 年 11 月南京医科大学第一附属医院乳腺病科                           本研究共纳入102例原发性乳腺癌患者，其中，
                收治的原发性乳腺癌病例进行筛选。入组标准：                             女 101 例，男 1 例，年龄 20~73 岁，平均年龄 42.3 岁。
                ①诊断年龄≤40 岁的乳腺癌个人病史；②任何年龄                          在 102 例中，检测出 70 例 18 个基因的 82 个突变位
                的乳腺癌或卵巢癌家族史（2个或2个以上的血缘近                           点，其中 51 例发生单点突变，16 例发生 2 个位点突
                亲）；③同时或先后诊断的双侧乳腺癌或多灶性乳                            变，3例发生3个位点突变（表1）。检测出的突变基
                腺癌，且有≥1 个血缘近亲有肿瘤病史；④发病年龄                          因包括 BRCA1、BRCA2、PTEN、ATR、EMSY、FAN⁃
                ≤60 岁的三阴型乳腺癌；⑤同一个体的乳腺癌和卵                          CA、FANCI、NBN、MRE11A、ATM、BRIP1、CHEK1、
                巢癌；⑥男性乳腺癌。收集符合以上至少一项标准                            CHEK2、 PALB2、 BARD1、 RAD51B、 RAD51C、
                患者的 HRR 相关基因二代测序检测结果及临床病                          RAD51D 和 RAD51L，其中 BRCA2 基因突变频数最
                理资料。该研究得到南京医科大学第一附属医院                             多，共有15例，其次为BRCA1（13例）和ATM（11例）
                伦理委员会的批准，所有患者签署知情同意书。                            （图 1）。从患者肿瘤特征来看，7 例为双侧乳腺癌，

                1.2  方法                                           6 例肿瘤为多灶性，7 例肿瘤分子分型存在异质性
                    收集患者外周血4 mL，使用乙二胺四乙酸（eth⁃                    （表 1）。
                ylene diamine tetra acetic acid，EDTA）抗凝管于 4 ℃     2.2  基因突变与临床病理特征的关系
                储存并运输，并在 3 d 内进入检测流程。对外周血                             为了分析 HRR 相关基因突变与临床病理特征
                标本进行基因组 DNA 提取并从中取 200 ng 进行文                     之间的关系，将102例患者分为未突变、BRCA突变、
                库构建。HRR相关基因的整个编码序列（包括剪接                           非BRCA突变3个亚组，分别统计各组患者年龄、淋
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