Page 12 - 南京医科大学学报自然科学版
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                                                                                                  第40卷第6期41卷第3期
               ·318 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2020年6月年3月
                                                                                                   2021

              的探究成为全球科学家需要解决的问题。                                域蛋白家族的一员。近年来，多项研究证实炎症小体
                  巨噬细胞是连接固有免疫和适应性免疫的重                           AIM2在调控病毒感染、肿瘤发生及动脉粥样硬化产
              要免疫细胞，广泛分布于多种组织和器官，已有多                            生过程中发挥重要作用          ［11-13］ ，但是其在代谢及肥胖相
              项研究表明巨噬细胞参与代谢类疾病、心血管疾病                            关疾病中的调控作用尚不明确。
                                         ［4］
              及肿瘤等多种疾病的调控反应 。异质性和可塑性                                 本研究利用高脂诱导肥胖小鼠模型，着重探究
              是巨噬细胞的重要特征，在外界不同环境因素刺激                            炎症小体AIM2在调控肥胖发生过程中的角色和功
              下，巨噬细胞表现出不同的分型。主要包括经典活                            能，为临床肥胖患者的诊治提供一定理论依据。
              化型（促炎型）M1 型和替代活化型（抑炎型）M2 型，
                                                                1  材料和方法
              M1型主要受脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和干扰
              素（interferon ，IFN）⁃γ激活，分泌促炎细胞因子白介                 1.1  材料

              素（interleukin，IL）⁃6、肿瘤坏死因子（tumor necrosis              AIM2 全敲小鼠（Jackson 公司，美国），AIM2 条
              factor，TNF）⁃α、诱导型一氧化氮合酶（inducible ni⁃             件敲除小鼠（北京百奥赛图生物公司）；高脂饲料
              tric oxide synthase ，iNOS）等，主要发挥促炎、杀菌及            （北京欣晨夕生物公司）；葡萄糖（生工生物公司，美
              抗原递呈等功能，M2 型主要受 IL⁃4 和 IL⁃13 刺激激                  国）；胰岛素（Invitrogen 公司，美国）；苏木素和伊红
              活，高表达精氨酸酶1（arginase⁃1，ARG1）、发现于炎                  （Sigma 公司，美国）；血糖试纸（罗氏生物公司，美
              症区域 1（found in inflammatory zone 1，FiZZ1）蛋白、      国）；APC⁃F4/80、FITC⁃CD⁃11b、PE⁃CY7⁃CD⁃86 流式

              甘露糖受体 C1 样蛋白 1（mannose receptor C type 1          抗体、PE⁃CD⁃206流式抗体，胶原酶Ⅱ（Thermo公司，
              like protein 1 ，MRC1），主要起抑炎、组织修复等功                美国）；DMEM 高糖培养基和血清（Gibco 公司，美
              能 。近年来，多项研究证实脂肪组织巨噬细胞                             国），TRIzol 试剂盒（Life 公司，美国），逆转录试剂盒
                ［5］
             （adipose tissue macrophage，ATM）在调控代谢炎症             和 SYBR Green（诺唯赞生物试剂公司，美国），引物
              过程中发挥重要作用 ，已有研究表明，内质网应激                           由上海生工生物有限公司合成。
                                 ［6］
              琥珀酸受体 1（succinate receptor 1，SUNCR1）可以            1.2  方法
              通过调控脂肪相关巨噬细胞极化来调控肥胖的发                             1.2.1 肥胖小鼠模型
              生 。近期一系列研究提示巨噬细胞极化在调控脂                                 所有小鼠（每笼饲养4只）置于正常光照条件下
                ［7］
              肪发生过程中发挥重要作用。                                     喂养，分为正常饮食组（普通饲料）和高脂饮食组
                  近年来研究表明，肥胖及肥胖相关疾病与炎症                          （60%高脂饲料），高脂饮食组小鼠 7 周龄时开始喂
              小体的功能异常有关。炎症小体是机体先天免疫                             高脂饲料，连续 15 周，期间每周称小鼠体重。本研
              系统细胞内多分子复合体识别受体，可以识别多种                            究经南京医科大学实验动物福利伦理委员会批准。
                         ［8］                                    1.2.2 小鼠葡萄糖耐受和胰岛素敏感性实验
              体内外信号 。炎症小体主要由核心蛋白 NLR
             （NOD⁃like receptor）或PYHIN（pyrin and HIN domain⁃         小鼠饥饿 16 h 后，开始进行葡萄糖耐受实验，
              containing）分子、接头蛋白 ASC（apoptosis⁃associated       腹腔注射葡萄糖（1.5 g葡萄糖/kg小鼠体重），尾尖取
              speck⁃like protein containing a CARD）以及蛋白酶        血，用罗氏血糖仪测小鼠血糖。血糖测定时间依次
              Caspase⁃1 和 Caspase⁃11 组成。炎症小体核心分子                为 0、15、30、60、90 min，小鼠饥饿 6 h 后进行胰岛素
              感受病原和体内危险信号刺激后，可招募接头蛋白                            耐受实验，腹腔注射胰岛素（0.75 U/kg 小鼠体重），
              和蛋白酶组装成多分子蛋白复合体，进而诱导蛋白                            尾尖取血，用罗氏血糖仪测小鼠血糖。
              酶激活剪切炎症因子IL⁃1β和IL⁃18前体形成成熟形                       1.2.3 骨髓来源的巨噬细胞分离与培养
              式，成熟形式的IL⁃1β和IL⁃18分子随后释放到细胞                            取 8~12 周龄的小鼠，处死后，分离小鼠大腿骨

              外激活炎症反应。研究报道抑制性炎症小体 NOD                           置于无菌 PBS 的培养皿中，清除关节连接处的其他
              样受体家族（NOD⁃like receptor，NLR）的 NLRP12 可            组织，并沿关节处分开。将干净的骨头转移到新的
              以通过调控肠道菌群稳态抑制高脂诱导的小鼠肥                             带有 PBS 的皿中，剪开骨头的末端。用含有培养基
              胖的产生 。另外，研究证实炎症小体 NLRP1 和                         的5 mL注射器针头插入骨头的开口处，将骨髓吹入
                       ［9］
              NLRP3 也参与抑制高脂诱导的小鼠肥胖及胰岛素                          一个新的培养皿中。1 000 r/min 离心 5 min，弃上
              抵抗  ［10］ 。炎症小体黑素瘤缺乏因子2（absent in mel⁃             清，加入 1 mL RPMI1640 培养基重悬，再加入 20 mL
              anoma 2，AIM2）属于干扰素诱导的含有HIN⁃20结构                   10%的L929培养基，接种到细胞培养瓶中。放置于
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