Page 123 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第7期 南京医科大学学报（自然科学版）
2021年7月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·1053 ·

·临床医学·

肺炎克雷伯菌分离株毒力基因分布与临床特征的相关性研究

沈旭晨 ，蔡培泉 ，糜祖煌 ，王春新 ，赵 琪 3
1
2
1*
3
南京医科大学附属无锡人民医院呼吸与危重症医学科，江苏 无锡 214023；无锡市克隆遗传技术研究所，江苏 无锡
1 2
214026；南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科，江苏 无锡 214023
3
［摘 要］ 目的：分析肺炎克雷伯菌 8 种毒力基因在肺炎克雷伯菌肺炎患者临床分离菌株中的分布和临床特征的关系。方
法：收集2019年8—9月南京医科大学附属无锡人民医院分离的引起肺部感染的50株肺炎克雷伯菌，PCR法检测毒力基因，统
计并分析肺炎克雷伯菌毒力基因阳性率及患者的临床分布特征。结果：50株菌株mrkD、ureA基因阳性率为100%，fimH、entB、
ybtA基因阳性率分别为86%、96%、64%，未检测出wabG、uge、clbA基因。携带fimH基因肺炎克雷伯菌菌株的感染者较非携带
该基因细菌的感染者更易出现咳嗽咳痰、胸闷气短的症状。最常见的组合为fimH+mrkD+ureA+entB+ybtA，同时检出5种毒力
基因的肺炎克雷伯菌感染者临床表现明显，但病死率低。结论：随着毒力基因种类的增加，咳嗽咳痰、胸闷气短症状的比例基
本呈上升趋势，发热呈下降趋势。
［关键词］ 肺炎克雷伯菌；毒力基因；耐药性
［中图分类号］ R563.1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2021）07⁃1053⁃05
doi：10.7655/NYDXBNS20210719

肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）通常 伦理委员会批准，所有患者均知情同意。
存在于上呼吸道及肠道，是常见的条件致病菌。在近 1.2 方法
年的医院细菌耐药监测中，KP 检出率居第 2 位 ［1-2］ 。 1.2.1 细菌鉴定与药敏分析
高毒力型肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneu⁃ 细菌鉴定与药敏分析采用法国生物梅里埃公
moniae，hvKP）合并多重耐药在国内已有多次报道 ［3-5］ ， 司VITEK⁃2全自动细菌鉴定及药敏分析仪。
甚至新生儿也常有感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯 1.2.2 靶基因检测
［6］
菌的报道 。KP对各种年龄段人群造成威胁，使临 细菌 DNA 提取采用非离子去污剂 Triton X⁃100
床治疗面临艰巨挑战。尽管目前国内外有大量 裂解加蛋白酶 K 消化法。菌株先作纯培养，然后挑
hvKP 的研究报道 ［7-9］ ，但是缺乏肺炎克雷伯菌肺炎 取单个菌落置入已预混好的 Triton X⁃100 与蛋白酶
患者KP 分离株的毒力基因分布与临床特征相关性 K 溶液中，55 ℃温浴 120 min，再 95 ℃温浴 10 min。
研究。本研究选定了与 KP 主要毒力因子菌毛、荚 -20 ℃保存待检。
膜、铁载体密切相关的fimH、mrkD、wabG、uge、ureA、 PCR 检测毒力基因。每种毒力基因检测 PCR
entB、clbA、ybtA 这 8 种毒力基因进行检测，并分析 扩增的反应系统均为：耐热DNA聚合酶（TaKaRa 公
其与患者临床特征的相关性，现报道如下。 司，日本）1 U（0.2 μL），耐热DNA聚合酶匹配的10×缓

冲液 2 μL；P1 引物 2 μL（1.0 μmol/L），P2 引物 2 μL
1 对象和方法
（1.0 μmol/L），dNTPs 2 μL（各种浓度均 2 mmol/L），
1.1 对象 超纯水 7 μL，菌株 DNA 提取液 4.8 μL，合计总反应
选取 2019 年 8—9 月南京医科大学附属无锡人 体积20 μL，引物序列见表1。PCR检测扩增热循环
民医院住院患者各种临床标本中分离出KP 菌株的 为：95 ℃预变性 3 min，然后 95 ℃变性 0.5 min，55 ℃
50 例肺部感染患者作为研究对象。本研究经医院 复性 0.5 min，72 ℃延伸 1.0 min，30 个循环，最后一

轮延伸72 ℃延长至5 min。经2%琼脂糖凝胶电泳20
［基金项目］ 无锡市人民医院后备学科带头人 min，紫外线仪下凝胶上出现与阳性对照分子量相同
∗ 的条带即判别为阳性。
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：cpq6868@163.com