Page 136 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第1期
·130 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年1月
GeneXpert 检测仪器及配套试剂（Cepheid 公 学：实验室Ⅲ级指南》中推荐的NALC⁃NaOH 方法进
TM
TM MGIT 960 分枝杆菌培养检 行处理。
司，美国），BACTEC
测系统及配套试剂（BD公司，美国），分枝杆菌药敏 体液：用无菌方法采集的标本，即使不经过净
罗氏培养基、抗酸染色液（珠海贝索生物技术有限公 化处理也不会有其他细菌被接种到培养管中。若
司），Olympus CX23显微镜（奥林巴斯公司，日本）。 预计标本中包含其他杂菌，则标本必须经过净化处
1.2 方法 理。
1.2.1 直接涂片抗酸染色镜检法 粪便：挑取 1 g 粪便放入 5 mL 无菌生理盐水中
取标本于玻片正面均匀涂抹成 10 mm×20 mm 制备成悬浊液，将悬浊液放在涡旋器上涡旋震荡
的卵圆形薄膜，自然干燥后，置于染色架上，玻片间 5 s，再使用《大众健康真菌生物学：实验室Ⅲ级指
距保持 10 mm 以上；加热固定（5 s 内将玻片来回过 南》中推荐的NALC⁃NaOH方法处理标本。
火焰 4 次）；滴加石碳酸复红溶液盖满玻片，加热至 标本处理 15~20 min 后，加 pH 值为 6.8 的磷
出现蒸汽后，停止加热，保持染色 5 min，加热时勿 酸盐缓冲溶液将经过处理的标本混合液稀释至
使染色液沸腾。流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去 50 mL。以 3 000 g 离心 15 min 后弃上清，然后使用
染液，沥干；滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色 1~ 磷酸盐缓冲溶液 1~3 mL 复溶沉淀物制成悬液，在
2 min；如有必要，需流水冲去酸性酒精溶液后，再次 BBL MGIT 分枝杆菌 7 mL 培养管中加入 0.5 mL
TM
TM
脱色至无可视红色为止；流水自玻片一端轻缓冲洗 悬液，并将 1 滴（0.1 mL）悬液加入到分枝杆菌固体
10~20 s，冲去酸性酒精溶液，沥干；滴加亚基蓝溶液 培养基上。将 BBL MGIT 分枝杆菌培养管放入
TM
TM
染30~60 s；流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染液，沥 BACTEC MGIT 960分枝杆菌培养检测仪器，培养
TM
TM
干，100 倍油镜观察，在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈 管在仪器推荐的 42 d 培养周期内将被自动检测。
红色，其他细菌及细胞呈蓝色。观察结果按规程要 将阳性培养管从仪器中取出，使用快速酸涂片染色
求进行报告 。 法进行复核，观察涂片和培养结果。
［6］
1.2.2 GeneXpert法 1.2.4 分枝杆菌绝对浓度法药物敏感性试验和菌
痰标本：取 1 mL 痰标本放置到旋盖锥形管中， 种初步鉴别试验
加入 2 mL 样本处理液，使用涡旋仪震荡 10 s，室温 取培养阳性的分枝杆菌，调整至规定浓度，根
静置 10 min；再次使用涡旋仪震荡 10 s，室温静置 据需要接种到相应型号的罗氏培养基上，37 ℃恒温
5 min，直至痰液充分液化，取2 mL完全液化的样本 培养28 d，如对照培养基上分枝杆菌生长良好，则根
缓慢加入检测匣的加样孔中，使用 GeneXpert 仪器 据对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩⁃2⁃羧酸肼（TCH）2种
进行检测。 鉴别培养基上分枝杆菌生长情况按规定报告初步
灌洗液：将灌洗液（多于5 mL）转移至锥形离心 鉴别试验结果。如果2种鉴别培养基上均无分枝杆
管中，3 000 g离心15 min，弃上清，加入2 mL样本处 菌生长报告为牛结核分枝杆菌，如果 2 种鉴别培养
理液并涡旋震荡，重悬沉淀物，充分混匀，将2 mL经 基上均有分枝杆菌生长报告为非结核分枝杆菌，如
过处理的样本加入试剂匣，GeneXpert进行检测。 果 PNB 培养基上无分枝杆菌生长而 TCH 培养基有
胸腹水：将 EDTA 抗凝管收集的胸腹水转移至 分枝杆菌生长报告为人型结核分枝杆菌。本文对
锥形离心管中，3 000 g离心15 min，弃上清，加入2 mL 药敏结果不做讨论。
样本处理液并涡旋震荡，重悬沉淀物，充分混匀，将 1.3 统计学方法
2 mL 经过处理的样本加入试剂匣，GeneXpert 进行 采用 Excel 软件进行数据整理，使用 SPSS25.0
检测。 软件进行统计分析，计数资料采用例数和构成比或
GeneXpert 检测结果通过 GeneXpert System 测 率（%）进行描述，两种检测方法比较采用配对卡方
量荧光信号和内设的算法来判定，由系统直接报告 检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
结果，并在“预览结果”窗口显示。较低的CT值代表
2 结 果
了较高的DNA模板起始浓度；较高的CT值代表了较
低的DNA模板起始浓度。 2.1 766例标本GeneXpert与涂片法检测结果比较
1.2.3 960分枝杆菌快速培养 766 例标本分别使用直接涂片抗酸染色镜检
痰液、灌洗液：标本使用《大众健康真菌生物 法和 GeneXpert 检测结核分枝杆菌，其中涂片法和
