Page 141 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第1期 马菁菁，陶桂香，陈 倩. 多重PCR结合毛细管电泳检测儿童呼吸道病原体方法的建立及应用［J］.
2022年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（01）：133-136 ·135 ·

（ U ） 43.50 MP （ U ） 87.78 KP （ U ） 70.92 P.Ae
相对荧光强度 23.61 相对荧光强度 44.50 相对荧光强度 36.51

3.71
20 100 200 300 400 1 000 2 000 1.23 20 100 200 300 400 1 000 2 000 2.09 20 100 200 300 400 1 000 2 000
长度（bp） 长度（bp） 长度（bp）
（ U ） 123.79 Sau （ U ） 48.39 Ecl （ U ） 29.22 Cal
相对荧光强度 61.45 相对荧光强度 25.70 相对荧光强度 16.68

-0.88
20 100 200 300 400 600 1 000 2 000 3.02 20 100 200 300 400 1 000 2 000 4.14 20 100 200 300 400 1 000 2 000

长度（bp） 长度（bp） 长度（bp）
（ U ） 51.43 Aba
相对荧光强度 27.46

3.49
20 100 200 300 400 1 000
长度（bp）
图1 7种呼吸道病原体单重PCR结合毛细管电泳检测结果

调整扩增程序以及引物浓度，至无非特异性扩增条 0.4%），3例鲍曼不动杆菌阳性（阳性率为1.1%）。该
带，最终建立一个7种呼吸道病原体多重PCR扩增结 检测结果同痰培养以及实时荧光定量PCR（因肺炎
合毛细管电泳的检测系统，该系统扩增产物进行毛细 支原体较难培养，故与实时荧光定量PCR结果作对
管电泳，均检测到对应片段，无明显杂峰出现（图2）。 比）比较，敏感性提高，多检测3例（表2）。

2.3 临床样本检测结果 2.4 多重 PCR 与单重 PCR 结合毛细管电泳检测的
对266例儿童呼吸道病原体痰液样本，进行7重 比较
PCR扩增并结合毛细管电泳分析，结果显示37例阳 在 266 例儿童呼吸道病原体痰液标本中，随机
性，其中：8例肺炎支原体阳性（阳性率为3.0%），2例 选择 100 例，分别进行 7 种病原体的单重 PCR 扩增
白色假丝酵母阳性（阳性率为 0.8%），10 例金黄色 并结合毛细管电泳和多重 PCR 结合毛细管电泳检
葡萄球菌阳性（阳性率为 3.8%），8 例肺炎克雷伯菌 测分析，结果一致（表3）。
阳性（阳性率为3.0%），2例铜绿假单胞菌阳性（阳性
3 讨 论
率为 0.8%），1 例阴沟杆菌复合群阳性（阳性率为
引起儿童 ARI 的病原体种类较多，涉及多种病
16.20
Sau 毒和细菌，且临床症状表现相似，因此临床医生很
难根据临床症状做出准确的病因诊断，如何快速准
（ U ） KP 确地检测出患者所感染的呼吸道病原体一直是临
相对荧光强度 8.86 Ecl P.Ae 原体PCR扩增结合毛细管电泳分析的技术。
。本研究建立了7种呼吸道病
［14］
床诊断面临的难点
Cal
这种检测方法可以一次性检测并区分多种呼
MP
吸道感染的病原体。本研究选取各种呼吸道感染
Aba
病原体的保守序列进行PCR分析，在设计引物的同
1.53 时注意不同病原体产物长度的差异化，以便于毛细
20 100 200 300 400 500 1 000
长度（bp） 管电泳的直观判断分析。阳性参考品经毛细管电
图2 7种呼吸道病原体多重PCR结合毛细管电泳检测结果