Page 139 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第1期 南京医科大学学报（自然科学版）
2022年1月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·133 ·

·技术与方法·

多重 PCR 结合毛细管电泳检测儿童呼吸道病原体方法的建立

及应用

马菁菁 ，陶桂香 ，陈 倩 1*
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南京医科大学附属儿童医院儿科研究所，江苏 南京 210029；南京医科大学儿科学院，江苏 南京 210029
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［摘 要］ 目的：建立肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.au）、肺炎克雷伯菌
（Klebsiella pneumoniae，KP）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，P.Ae）、阴沟杆菌（Enterobacter cloacae，Ecl）、白色假丝酵母
菌（Candida albicans，Cal）、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，Aba）7 种儿童呼吸道病原体多重 PCR 结合毛细管电泳法检
测体系。方法：随机收集南京市儿童医院 2020 年 11—12 月 266 例儿童呼吸道病原体样本，针对 MP、S.au、KP、P.Ae、Ecl、Cal、

Aba保守序列设计特异性引物，设计并优化多重PCR结合毛细管电泳检测体系；将该检测结果与细菌培养以及荧光定量PCR
比对，评估该方法的检测性能（灵敏度、特异度）。结果：所设计引物可以特异性扩增出呼吸道病原体；多重PCR结合毛细管电
泳检测体系检出敏感性高；与其他呼吸道感染病原体未出现交叉反应，无明显的非特异峰，特异性较好。结论：成功建立一种
能够快速筛查7种常见儿童呼吸道病原体的多重PCR结合毛细管电泳的检测方法。
［关键字］ 儿童；呼吸道病原体；多重PCR；毛细管电泳

［中图分类号］ R446.5 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2022）01⁃133⁃04
doi：10.7655/NYDXBNS20220126

急性呼吸道感染（acute respiratory infections， 酸扩增检测，已经被逐渐运用在临床检验过程中，
ARI）是儿科最常见的呼吸系统疾病，ARI 的发病率 它是一种速度快、灵敏性高、特异性强的检测方法，
占儿童呼吸系统疾病首位 ［1-3］ ，据统计，5岁以下儿童 可以显著减少检测操作时间和成本，并且能够快速
每年发生的 600 万例死亡中有 100 万例是由 ARI 引 得到结果 ［11］ 。此外，多重核酸扩增检测能够提供多
起的 ［4-5］ ，给儿童的生长发育和身体健康带来了较大 目标产物的共扩增，从而能够对呼吸道疾病混合感
危害。许多病毒和细菌都能引起 ARI，并且由于患 染的预后和复发提供重要信息。但是，目前通常使
者可能携带不止一种病原体，不同病毒之间以及病 用的多重PCR检测试剂盒检测病原体的种类有限：
毒和细菌之间的临床体征相互重叠，往往使得仅基 Zhang 等 ［12］ 的研究只能检测大肠杆菌的各种亚型，
于临床表现的病因诊断变得困难，无法确定致病原 不能检测多种病原体；刘晓萌等 ［13］ 对肺炎常见病原
因，导致抗生素治疗无效，造成抗生素滥用以及医 菌的多重 PCR 检测，仅能检测肺炎链球菌、流感嗜
源性交叉感染 ［6-7］ ，因此需要对呼吸道病原体进行快 血杆菌、肺炎克雷伯菌 3 种病原体。这一现状导致
速检测，从而帮助诊断和准确用药。 在快速鉴别病原体方面存在较大困难，不能及时指
目前国内外对呼吸道病原体检测的方法较多， 导临床治疗。
主要包括传统的分离培养方法、免疫学检测方法以 本研究以儿童常见呼吸道病原体：肺炎支原体
及新兴的分子生物学检测方法 ［8-10］ 。病毒的分离培 （Mycoplasma pneumoniae，MP）、金 黄 色 葡 萄 球 菌
养及鉴定周期较长；免疫学方法在窗口期通常不能 （Staphylococcus aureus，S.au）、肺炎克雷伯菌（Klebsi⁃
反映现症感染；单病原体的 PCR 方法检测通量较 ella pneumoniae，KP）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas
低。随着病原体分子诊断技术的不断提高，多重核 aeruginosa，P.Ae）、阴 沟 杆 菌（Enterobacter cloacae，
Ecl）、白色假丝酵母菌（Candida albicans，Cal）、鲍曼
不动杆菌（Acinetobacter baumannii，Aba）作为诊断目
［基金项目］ 南京市医学科技发展课题（YKK17161）；南京医
科大学科技发展基金（NMUB2019201） 标，建立多重 PCR 结合毛细管电泳法检测体系，以
∗ 提高儿童呼吸道感染诊断的效率。
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：js_chenqian@sina.com