Page 106 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第3期
·408 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年3月

screening of susceptible populations exposed to DDT and the optimization of risk assessment.
［Key words］ organic chlorine pesticides；DDT；CYP2B6；biotransformation；metabolites
［J Nanjing Med Univ，2022，42（03）：407⁃414］

有机氯农药（organochlorinated pesticide，OCP） CYP2B6 有直接结合作用关系 ［15］ 。还有研究发现，
曾在农业生产中大规模运用，作为持久性有机污染 DDT 及其代谢产物对 CYP2B 的诱导能力强于其对
物（persistent organic pollutant，POP）中的一大类，其 CYP3A 和 CYP1A 家族的诱导能力 ［16］ 。但迄今尚未
中一些 OCP 生物毒效应已经超过了其对农业的贡 见CYP2B6与DDT代谢的关系研究。
［1］
献 。其中滴滴涕（dichloro⁃diphenyl⁃trichloroeth⁃ 为此，本研究在建立生物样本中DDT及其代谢
ane，DDT）即 2，2⁃双（4⁃氯苯基）⁃1，1，1⁃三氯乙烷具 产物检测方法的基础上，通过体内外实验评价
有强效杀虫力，一开始被广泛运用于疟疾等传染 CYP2B6 与 DDT 代谢的关系，为阐明 DDT 代谢机制
病，然而由于其对动植物产生的杀伤性以及环境污 并为环境中DDT的健康风险评估提供实验依据。
染问题，1983 年后各国开始禁用，但 DDT 在环境中
1 材料和方法
十分稳定且有残留 。WHO报告，大多数发展中国
［2］
家仍将持续受到环境DDT污染的影响，甚至室内灰 1.1 材料
［3］
尘中都能检测到较高水平的DDT 。 6 种 DDT 混合标准品（p，p’⁃DDT、o，p’⁃DDT、
DDT 主要由皮肤直接接触或饮食进入人体，其 p，p’⁃DDE、o，p’⁃DDE、p，p’⁃DDD、o，p’⁃DDD）（上海
代谢产物 DDE 是人类血清中最常检测到的 OCP 。 百灵威公司）；异丙醇（色谱纯）、正己烷（色谱纯）（上
［4］
2007 年全国总膳食研究表明我国膳食中 DDT 的膳 海ANPEL公司）；甲基叔丁基醚（Sigma⁃Aldrich公司，
食暴露平均水平是 16 ng/（kg·d） 。DDT 在人体内 美国）；重组酶CYP2B6（Cypex 公司，美国）；CYP2B6
［5］
经核受体蛋白和转运蛋白等转运到肝脏和相应靶 酶活性检测试剂盒（GMS18053.1）、大鼠 CYP2B1 酶
器官，其代谢过程需要细胞色素 P450 代谢酶（cyto⁃ 活性检测试剂盒（GMS18019.1）（Genmed Scientifics
［6］
chrome P450，CYP）的作用 ，主要代谢产物为 1，1⁃ 公司，美国）；抑制剂KR⁃Ⅱ（上海阿拉丁公司）；CYP
二氯⁃2，2⁃双（对氯苯基）乙烯［1，1⁃dichloro⁃2，2⁃bis 酶抑制剂8⁃MOP；数控氮吹仪（MD200⁃2）（上海之信
（4⁃chlorophenyl）ethylene，DDE］或 1，1⁃二氯⁃2，2⁃双 仪器有限公司）；INDinnite M200 酶标仪（BD 公司，
（对氯苯基）乙烷［1，1⁃dichloro⁃2，2⁃bis（4⁃chlorophe⁃ 美国）；NanoDrop2000超微量分光光度仪、气相质谱
nyl）ethane，DDD］，DDE 的半衰期更长且更稳定，常 联用仪TSQ⁃8000（Thermo Scientific公司，美国）。
［7］
蓄积在人体脂肪组织中 。目前研究已发现DDT及 1.2 方法
［9］
其代谢产物可以引起代谢疾病 ，生殖发育异常 ，影 1.2.1 DDT检测方法的建立
［8］
响肿瘤的发生发展 ［10］ 。因此，为更好明确DDT以及 采 用 GC⁃MS/MS 检 测 DDT，色 谱 柱 为 DB⁃5u
其代谢产物毒作用的机制，有必要对DDT的生物转 （30 m×0.25 mm×0.25 μm）毛细管柱，检测温度设为
化途径进行研究。 270 ℃，载气为高纯度氦气，柱流量为1.0 mL/min，高纯
CYP 酶是哺乳动物体内重要的Ⅰ相代谢酶，介 度甲烷作为辅助气体，流速1.0 mL/min；传输线温度
导许多药物和外源化学物的代谢，具有代谢解毒或 250 ℃，离子源温度250 ℃，柱始温80 ℃保持0.5 min，
代谢活化的作用 ［11］ 。CYP2B6 是重要的肝脏 CYP 310 ℃保持5 min，全程序17 min，离子源为ESI，正离
酶，约占肝脏总 CYP 含量的 3%~6%，许多外源污染 子模式，采用AutoSRM采集数据并定量，根据m/z相
物是其代谢底物，如尼古丁等 ［12-13］ 。而大鼠CYP2B1 对丰度和特征峰确定 DDT 的特征离子。用 DDT 标
是CYP2B6的同源酶，蛋白质序列同源性为74%，虽 准品配制标准曲线并以外标法定量，根据检测所得

然结构略有差异，但文献报道表明大多数 CYP2B6 峰面积以及浓度绘制物质标准曲线，校正曲线相关
的底物均可被 CYP2B1 代谢，代谢活性位点具有保 系数（r）控制在0.99以上，每个样品检测均设置3个
守 性 ，因 此 大 鼠 CYP2B1 常 作 为 在 体 内 研 究 人 重复，并以信噪比（S/N）=3 时样品对应浓度确定检
CYP2B6介导生物转化过程的替代酶 ［14］ 。分子对接 测限，控制结果相对偏差不超过算数平均值的
模 型 计 算 表 明 包 括 OCP 在 内 的 41 种 POP 均 与 15%，计算样品回收率不低于80%。