Page 40 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第3期
·342 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年3月

司，美 国）和 TRIzol 试 剂（Invitrogen 公 司 ，美 国） （x ± s）表示，行t检验。计数资料均以例表示，行卡
提取血浆 RNA 和血浆外泌体中的 RNA，反转录为 方检验。Logistic 回归分析 PND 的影响因素。P <
cDNA。ABI 7900 快速实时 PCR 系统（ABI 公司，美 0.05为差异有统计学意义。
国）进行检测分析，引物序列为：miR⁃409⁃3p，上游
2 结 果
5′⁃TGGTACTCGGAGAGAGGTTACCC⁃ 3′，下游 5′⁃
ATGGACTATCATATGCTTACCGTA ⁃ 3′ ；GAPDH 对 2.1 患者的临床特征
照，上游 5′⁃AACTTTGGCATTGTGGAAGG⁃3′，下游 本研究总共纳入了76例患者，均完成了认知功
5′⁃GGATGCAGGGATGATGTTCT⁃3′。PCR 条件为 能测试（表1），其中24例在冠状动脉搭桥术患者围手
95 ℃ 5 min，94 ℃ 15 s，55 ℃ 30 s，40个循环。 术期出现了PND，52例未发生PND。患者围手术期的
1.3 统计学方法 临床特征情况如表2所示。两组在性别和BMI方面差

所有统计数据均使用 Stata 15.0 和 Graphpad 8 异均无统计学意义（P > 0.05）；然而，在年龄、手术时间
进行分析，正态分布的连续数据用均值±标准差 及教育年限方面差异均具有统计学意义（P < 0.05）。

表1 认知功能测试评分
Table 1 Cognitive function test scores （分，x ± s）
非PND组（n=52） PND组（n=24）
认知测试 P值 *
术前1 d 术后7 d P值 术前1 d 术后7 d P值
MMSE 27.33 ± 1.25 26.60 ± 1.74 0.016 27.14 ± 1.49 25.61 ± 1.86 0.003 0.027
CTT 36.91 ± 4.69 39.27 ± 5.56 0.021 36.85 ± 5.77 42.43 ± 6.10 0.002 0.029
DST 07.97 ± 1.52 07.24 ± 1.43 0.013 07.68 ± 1.93 06.42 ± 1.78 0.023 0.035
CDT 03.56 ± 0.39 03.24 ± 0.75 0.008 03.45 ± 0.85 02.87 ± 0.50 0.006 0.031
VFT 27.48 ± 3.91 25.98 ± 3.86 0.052 27.16 ± 4.13 23.43 ± 3.88 0.002 0.009
*：术后7 d，非PND vs. PND。

表2 患者临床特征
Table 2 Clinical characteristics of patients
临床特征 非PND组（n=52） PND组（n=24） t/χ 值 P值
2
性别（男/女，n） 30/22 14/10 0.003 0.958
年龄（岁，x ± s） 64.46 ± 5.58 76.67 ± 4.81 -9.240 < 0.001
教育年限（年，x ± s） 07.44 ± 1.61 06.50 ± 2.36 2.034 0.046
BMI（kg/m ，x ± s） 23.16 ± 2.13 24.13 ± 2.40 -1.760 0.082
2
手术时间（h，x ± s） 04.49 ± 0.71 05.82 ± 0.74 -7.461 < 0.001

2.2 外泌体的鉴定 3p 的表达水平。PND 患者血浆外泌体 miR⁃409⁃3p
首先，通过 TEM 观察外泌体为直径 40~150 nm 较非 PND 患者血浆中显著升高，差异倍数约为 3 倍
的囊泡，并具有均匀的茶托样形态（图 1A），大小分 （P < 0.001，图 2）。随后，采用 Logistic 回归分析
布由 NTA 测量（图 1B）。为了进一步确定收集的囊 PND 的影响因素，结果显示：患者的年龄、手术时间
泡是否为外泌体，通过Western blot检测了外泌体标 和外泌体 miR⁃409⁃3p 水平与 PND 独立相关（表
志物（CD63和TSG101）。如图1C所示，在分离的外 3）。上述结果表明高表达的血浆外泌体 miR⁃409⁃3p
泌体部分观察到 CD63 和 TSG101 表达水平升高， 与PND发展密切相关，且可作为PND的新型分子标
同时钙连接蛋白Calnexin表达水平降低。上述结果 志物。
证明，从患者血浆中提取的囊泡样物质为外泌体。
2.3 PND 患者血浆外泌体miR⁃409⁃3p 显著升高 3 讨 论
为了进一步揭示外泌体 miR⁃409⁃3p 与 PND 的 PND 是许多患者在外科手术后常见的并发症

关系，我们采用qRT⁃PCR检测血浆外泌体 miR⁃409⁃ 之一，尤其是心脏手术后，不仅使患者术后康复周