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第42卷第3期 陈睿泽，夏        奕. 1项初诊中国慢性淋巴细胞白血病患者的IGHV基因使用特征的单中心回顾性研究［J］.
                  2022年3月                     南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（03）：382-386                       ·383 ·


                所有患者随访截止日期为2020年6月。
                                                                  2  结 果
                1.2  方法
                1.2.1 PCR扩增与测序                                    2.1  患者临床特征
                    基因组 DNA（gDNA）使用 QIAmpDNA 试剂盒                      本研究共回顾性分析了291例于本中心就诊的
               （QIAGEN 公司，美国）提取。gDNA PCR 扩增采用                     初诊 CLL 患者，中位年龄为 59 岁（范围：16~86 岁）。
                IGHV 试剂盒 IGH Somatic Hypermutation Assay v2.0     患者临床特征如表1所示。
               （InVivo Scribe 公司，美国）。该试剂盒正向引物包                               表1 初诊CLL患者的临床特征
                括Leader引物和FR1引物，反向引物为JH引物。正                                临床特征               人数     百分比（%）
                向引物方面，优先采用 Leader 引物进行扩增，在                          男性（n=291）                 201       69.10
                Leader引物扩增失败后再尝试使用FR1引物。利用                          年龄＞60岁（n=291）             138       47.40
                直接测序法来确定 IGHV、IGHD、IGHJ 基因的序                        Binet B⁃C期（n=291）         198       68.00
                列。如测序序列图出现双峰，则采用克隆测序。测                              β2M升高（n=281）              113       40.20
                                                                    CD38阳性（n=252）             056       22.20
                序序列由 3130 Genetic Analyzer 检测（Life Technolo⁃
                                                                    ZAP70阳性（n=181）            073       40.30
                gies公司，美国）。
                                                                    CD49d阳性（n=111）            023       20.70
                1.2.2 IGH序列鉴定
                                                                    染色体核型异常（n=261）            147       56.30
                    IGH 重 排 结 果 由 IMGT 数 据 库 和 IMGT/V ⁃
                                                                    FISH
                QUEST 工具进行分析。与胚系 IGHV 序列相比，相                          del（17p）（n=291）         031       10.70
                似性<98%的IGHV序列被定义为IGHV⁃M，相似性≥                          del（11q）（n=291）         037       12.70
                98%被定义为IGHV⁃UM。                                       del（13q）（n=230）         111       48.30
                1.2.3  细 胞 遗 传 学 和 TP53、NOTCH1、SF3B1、                 12号染色体三体（n=229）         034       14.80
                MYD88基因突变检测                                         基因突变
                                                                      TP53突变（n=257）           028       10.90
                    采用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hy⁃
                                                                      SF3B1突变（n=243）          013       05.30
                bridization，FISH）检 测 了 CLL 细 胞 del（11q）、del
                                                                      NOTCH1突变（n=264）         024       09.10
               （17p）、del（13q）和 12 号染色体三体的情况 。并
                                                       ［6］
                                                                      MYD88突变（n=236）          025       10.60
                利用 Sanger 测序的方法研究了 TP53 基因（4 号⁃9 号
                外显子）、NOTCH1 基因（PEST 功能域）、SF3B1 基因                 2.2  IGHV突变状态与预后
               （14 号⁃16 号外显子）和 MYD88 基因（3 号⁃5 号外显                     291 例初诊 CLL 患者中，119 例 IGHV⁃UM（119/
                             ［7］
                子）的突变状态 。                                         291，40.9%），172 例 IGHV⁃M（172/291，59.1%）。中
                1.2.4 免疫表型分析                                      位随访 37 个月，IGHV⁃UM 的患者 TTFT（P < 0.001）
                    CD38、ZAP70和CD49d的流式细胞术检测方法                    和 OS（P=0.003）均显著短于 IGHV⁃M 的患者（图
                如前所述，三者的阳性截断值分别为 30%、20%和                         1）。本研究中我国CLL患者IGHV⁃M的比例与西方
                30% 。                                             CLL患者无显著差异（59.1% vs. 55.0%，P=0.158）。
                   ［8］
                1.3  统计学方法                                        2.3 IGHV基因家族和片段的使用
                    所有数据均使用 SPSS 25.0 软件进行统计分                         所有 CLL 患者中，最常用的 IGHV 家族分别为
                析。分类变量以百分比（%）表示，并使用 χ 检验                          IGHV3（145/291，49.8%）、IGHV4（76/291，26.1%）、
                                                        2
                或 Fisher 确切概率法进行分析。连续变量以平均                        IGHV1（46/291，15.8%）、IGHV2（9/291，3.1%）、
                值±标准差（x ± s）表示，并使用非配对 t 检验和                       IGHV5（9/291，3.1%）、IGHV7（4/291，1.4%）、IGHV6

                Mann Whitney U 检 验 分 析 。 总 生 存 期（overall         （2/291，0.7%）。
                survival，OS）被定义为从诊断到死亡或最后一次                           最常用的IGHV基因片段分别为IGHV3⁃7（28/291，

                随访的时间，至首次治疗时间（time to first treat⁃                9.6%）、IGHV3⁃23（24/291，8.2%）、IGHV4⁃34（23/291，
                ment，TTFT）被定义为诊断至首次治疗的时间。                         7.9%）、IGHV4⁃39（21/291，7.2%）、IGHV1⁃69（15/291，
                生存曲线由 Kaplan⁃Meier 方法构建，各组患者生                     5.2%）、IGHV4⁃59（10/291，3.4%）、IGHV3⁃30（10/291，
                存曲线比较使用 Log⁃rank 检验。P < 0.05 为差异                  3.4%）。
                有统计学意义。                                               与西方 CLL 患者数据相比，本中心中国 CLL 患
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