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第42卷第9期 王 学，伊 晴，刘小琴，等. 支气管肺泡灌洗液中CCL2水平对特发性肺纤维化患者预后的
2022年9月 判断价值［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（09）：1271-1278 ·1273 ·

1.2 方法 用自制灌洗针插入小鼠主支气管固定后，1 mL
1.2.1 血清和BALF中CCL2的收集 注射器吸取生理盐水弃掉针头连接灌洗针，缓慢注入
收集患者在南京鼓楼医院检验科进行检验后 小鼠全肺，行支气管肺泡灌洗，每次灌注量为1 mL，
剩余的血液标本，以 3 000 r/min 离心 5 min，收集上 回吸收后再灌注新的灌洗液，如此反复共3次，收集
层血浆/血清并在-80 ℃下储存直至测量。 所有 BALF，并在室温下以 1 500 r/min 离心 10 min。
全麻或局麻下，以电子支气管镜经鼻或经口进 上清储存在-80 ℃冰箱、待测。
入气管，常规观察后插入右中叶或左舌叶支气管开 上述标本通过酶联免疫吸附实验（ELISA）测定
口处，以37 ℃的无菌等渗盐水分次注入并回吸收，每 其中血清和BALF中CCL2的水平。
次20 mL，共进行5次相同操作、总体积为100 mL。混 1.2.6 Ashcroft评分
合所有回收的BALF，除去正常送检化验外所剩标本 Ashcroft 评分适用于评价肺、肝、心和肾的组织
立即通过两层纱布过滤，并在室温下以1 500 r/min离 纤维化。根据组织染色后胶原蛋白面积与整个切
心10 min。BALF储存在实验室-80 ℃。 片中选择的分析区域面积之比定量纤维化程度。

上述标本，通过酶联免疫吸附实验（enzyme⁃ 分为 0~8 分：0 分，组织无纤维化改变；1 分，肺泡壁
linked immunosorbent assay，ELISA）测定其中血清和 或支气管壁轻微纤维增厚；2、3分，肺泡壁或支气管
BALF中CCL2的水平。 壁中度增厚，对肺结构无明显损害；4、5分，纤维化增
1.2.2 GAP评分 加，肺结构明显损伤，无纤维带或小纤维团；6、7分，结
GAP模型由4个基线变量性别（G）、年龄（A）和 构严重变形，纤维面积大，“蜂窝肺”也属于这一类；
2个肺生理学变量（P）［用力肺活量与预计值百分比 8分，视野下肺结构大片纤维闭塞。分值越高，其纤
（percentage of predicted forced vital capacity，FVC%） 维化程度越重。这部分实验由2位病理学专家分别
和氧化碳弥散量（percentage of predicted diffusing 进行了独立评分。
capacity for carbon monoxide，DLCO%）］组成。根据 1.3 统计学方法
患者的性别、年龄、生理学指标依次打分，总分为 使用 SPSS 19.0 软件进行统计分析。对服从正
8 分。根据总评分，患者可分为Ⅰ期（0~3 分）、Ⅱ期 态或近似正态分布的计量资料以均数±标准差（x ±
（4~5分）和Ⅲ期（6~8分）。 s）的形式表示，两组间比较采用 t 检验，多组间比较
1.2.3 患者预后 采用单因素方差分析。使用斯皮尔曼相关性分
以电话随访的方式，联系患者及家属，咨询患者 析。通过 Kaplan⁃Meier 生存分析比较 IPF Ⅰ期、Ⅱ
当前的生存状况，随访时间截至 2021 年 8 月 31 日。 期、Ⅲ期之间的生存时间。受试者操作特征（receiver
不能接通电话者，再以短信息形式进行沟通。 operating characteristic，ROS）曲线分析 CCL2 与疾病
1.2.4 小鼠肺纤维化模型的构建 进展之间的关系。P < 0.05为差异有统计学意义。
将32只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为生
2 结 果
理盐水对照（contrast，C）组、博来霉素（bleomycin，
BLM）组，每组 16 只小鼠。小鼠气管内雾化注入 2.1 一般情况
5 mg/kg 的 BLM 构建肺纤维化模型，于实验造模后 IPF组患者中，男23例，女12例，男∶女为23∶12。
第21天，经实验动物电子计算机断层扫描证实模型 其中年龄最大为78岁，最小为43岁。吸烟者15例，
成功后，处死所有小鼠，收集小鼠肺组织、血清和 不吸烟者20例。CC组患者因支气管镜检的接受度

BALF。对肺组织石蜡切片行苏木精⁃伊红（hematox⁃ 差，故仅纳入10例，其中男6例，女4例，年龄最大为
ylin⁃eosin staining，HE）染色以及马松（Masson）染 72岁，最小为47岁（表1）。
色，观察小鼠肺组织的病理改变并行Ashcroft评分。 表1 一般情况比较
1.2.5 小鼠血清和BALF的收集 Table 1 Comparison of general conditions
各组小鼠腹腔注射50 μL的3%戊巴比妥钠进行 组别 例数 年龄（岁，x ± s） 男性［n（%）］ 吸烟［n（%）］
麻醉后，固定四肢，并打开其胸腔，用1 mL注射器在 CC组 10 59.70 ± 7.70 60.00 00.00
小鼠心脏搏动最强处刺入，缓慢回抽针筒可见血液流 IPF组 35 63.80 ± 9.00 65.70 42.90
入针管。室温下静置30~60 min，再以3 000 r/min离 2.2 血气分析检测结果
心5 min，收集上层血清并在-80 ℃冰箱储存、待测。 CC组、35例IPF患者依据GAP分期后分为（Ⅰ、