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第43卷第1期 田 祯，庄皓冉，江楚雯，等. YAP通过调控EEF1A2的表达促进肝癌细胞的迁移和侵袭［J］.
2023年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（01）：008-016 · 15 ·

YAP 过表达细胞组相比，干扰 EEF1A2 表达可以显 SK⁃HEP1为研究对象，建立了慢病毒介导的稳定敲
著抑制 YAP 过表达的 SMMC⁃7721 和 SK⁃HEP1 细胞 低 YAP 和敲低 EEF1A2 的细胞模型，采用 Transwell
的 迁 移 和 侵 袭（在 过 表 达 YAP 的 细 胞 中 干 扰 细 胞 迁 移 和 侵 袭 实 验 分 别 检 测 了 干 扰 YAP 和
EEF1A2表达后与YAP过表达细胞组迁移和侵袭的 EEF1A2 表达对肝癌细胞迁移和侵袭的影响，结果
相对细胞比例：SMMC7721 细胞为 1.246 ± 0.133 vs. 表明干扰YAP和EEF1A2表达均可以显著降低肝癌
1.519 ± 0.221 和 1.312 ± 0.163 vs. 1.538 ± 0.201； 细胞的迁移和侵袭能力。
SK⁃HEP1 细胞为 1.318 ± 0.155 vs. 1.631 ± 0.213 和 课题组前期分别建立了稳定敲低 YAP 和敲低
1.250 ± 0.217 vs. 1.683 ± 0.211，P < 0.05）。该研究 TAZ 的 SMMC7721 细胞模型，采用 RNA⁃seq 分析了
结果提示YAP可以通过上调EEF1A2而促进肝癌细 敲低YAP和敲低TAZ的细胞中转录组的改变，通过
胞的迁移和侵袭。 对二者差异表达基因取交集，发现两组差异表达基
因的重叠基因中，除了已经被证明受YAP/TAZ调控
3 讨 论
的与 EMT 相关的 Snail 和 E⁃CAD 外 ［11，16，21］ ，还包括
人类的EEF1A主要通过与氨酰基tRNA结合并 EEF1A2。本研究采用RT⁃qPCR和Western blot方法
将其携带到核糖体上，在蛋白质翻译过程中对新生 检测显示、干扰YAP表达可以下调EEF1A2，而YAP
多肽的延伸发挥重要调控作用。在 EEF1A 的两个 过表达则可以上调 EEF1A2，提示 YAP 可以调控
亚 型 中 ，EEF1A1 在 人 类 组 织 中 广 泛 表 达 ，而 EEF1A2 的表达。基于 Hippo 通路的下游效应分子
EEF1A2 表达仅限于心脏、骨骼肌、大脑等组织，具 YAP 作为转录共活化因子可以调控相关基因的表
有明显的组织特异性 ［12］ 。人类的EEF1A2基因定位 达而促进肿瘤的发生和发展 ［19，22］ ，本研究进一步利
于 20q13，研究表明，EEF1A2 在卵巢癌、乳腺癌、肺 用 CUT&RUN ⁃ qPCR 实 验 证 实 了 YAP 可 以 与
癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌以及肝癌等多种肿瘤中 EEF1A2 基因的启动子序列结合。CUT&RUN 实验
高表达，并与这些肿瘤的发生、发展以及患者的生 主要用于验证及探寻特定蛋白质和 DNA 的特定序
存期密切相关 ［3-6，13-15］ 。尽管有研究显示，EEF1A2可 列的直接相互作用，应用于研究转录调控以及组蛋
以通过激活 PI3K/AKT 信号通路，调控肌动蛋白细 白 修 饰 调 控 。 与 传 统 的 染 色 质 免 疫 沉 淀 技 术
胞骨架重塑，促进肿瘤细胞的迁移和侵袭，并证实 （chromatin immunoprecipitation，ChIP）相比，该技术
EEF1A2/PI3K/AKT 信号轴在肝癌的发生和发展进 的优点表现在所需要的细胞样品量低、无需交联、
程中发挥重要的调控作用 ［4-6］ ，但是有关 EEF1A2 的 超声打断、背景信号低和重复性好等，近年来已经
自身表达调控以及相关作用机制尚不明确。 被研究者广泛使用 ［23］ 。上述研究结果表明，YAP可
本研究首先通过查阅 TCGA 数据库，分析了 以通过与 EEF1A2 的启动子结合而调控 EEF1A2 的
EEF1A2 在肝癌以及癌旁组织中的表达，结果显示 表达。同时，本研究结果显示，EEF1A2 可以上调
EEF1A2 在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织， SMMC⁃7721 和 SK⁃HEP1 细胞中 EMT 相关的 Snail、
提示EEF1A2可能参与调控肝癌的发生和发展。其 下调 E⁃CAD，该结果提示 EEF1A2 可能通过调控肝
次，本研究采用Western blot方法检测了不同迁移能 癌细胞中 EMT 相关基因的表达，进一步促进肝癌
力的肝癌细胞系（低迁移能力的HepG2、SMMC7721 细胞的迁移和侵袭。为了探究 YAP 能否通过调控
和 Hep3B 以及高迁移能力的 HCCLM3 和 SK⁃HEP1 EEF1A2 的表达而促进肝癌细胞的迁移和侵袭，本
细胞）中YAP和EEF1A2的表达差异，结果显示YAP 研究通过在 YAP 干扰和过表达的 SMMC7721 和
和EEF1A2在高迁移能力的肝癌细胞中表达高于低 SK⁃HEP1肝癌细胞中分别联合过表达EEF1A2或干
迁移能力的肝癌细胞，提示 YAP 和 EEF1A2 的表达 扰 EEF1A2 表达后，采用 Transwell 实验检测了细胞
可能与肝癌细胞的迁移能力相关。有关 YAP 干扰 迁移和侵袭的改变，明确了 YAP 可以通过 EEF1A2
表达和过表达对肝癌细胞迁移和侵袭影响的研究 促进肝癌细胞的迁移和侵袭。
已经有相当多研究报道 ［16-20］ ，本研究重点围绕 YAP 综上所述，本研究结果表明，EEF1A2在肝癌组
能否通过调控EEF1A2的表达而促进肝癌细胞迁移 织中高表达，YAP 和 EEF1A2 与肝癌细胞的迁移能
和侵袭开展了进一步探究。基于YAP和EEF1A2在 力相关；YAP 可以与 EEF1A2 基因的启动子序列结
肝癌组织中高表达 ［5-9］ ，本研究首先选择低迁移能力 合，调控EEF1A2的表达，进一步促进肝癌细胞的迁
的肝癌细胞 SMMC⁃7721 和高迁移能力的肝癌细胞 移和侵袭。本研究结果可以进一步完善我们对