Page 34 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 34

第43卷第2期
               ·176 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年2月



                        mRNA相对表达量  3.0  *          shDNMT1 -  +  + -  -  18 kDa      nm )  ( 450  0.8  *  *  *
                   A    4.0    *   *            B Ti.(μmol/L)-  +  40  40         C   1.2  *
                                                                 +
                                                                    +
                                                     ox⁃LDL -
                                                             -
                                                                                      1.0
                                                      shNC +
                                                             -
                                                                    +
                                                                                      0.6
                        2.0
                                                     p16
                                                                                      0.4
                        p16  1.0 0                 β⁃actin             42 kDa        D  0.2 0
                       ox⁃LDL -  +   +   +                                       ox⁃LDL   -  +  +   +  +
                    Ti.(μmol/L)-  -  40  40                                      Ti.(μmol/L)-  -  40  40  40
                         shNC +  +   +   -                                       shNC     +  +  +   -  -
                      shDNMT1 -  -   -   +                                       shDNMT1  -  -  -   +  +
                                                                                 shp16    -  -  -   -  +
              D
                    ox⁃LDL   -           +            +            +           +
                Ti.(μmol/L)  -           -            40          40           40
                     shNC    +           +            +            -           -
                  shDNMT1    -           -            -            +           +
                     shp16   -           -            -            -           +
                                                                                           ( % )  20  *  *  *
                      EdU                                                                  15    *
                                                                                         EdU  阳性细胞百分比  10 5
                      Hoechst                                                             ox⁃LDL -  +  +  +  +
                                                                                            0
                                                                                       Ti.(μmol/L)-  -  40  40  40
                                                                                           shNC +  +  +  -  -
                                                                                        shDNMT1 -  -  -  +  +
                      Merge                                                                shp16 -  -  -  -  +



              E     ox⁃LDL   -            +           +            +            +         300    *
                Ti.(μmol/L)  -            -           40           40          40
                                                                                                    *  *
                     shNC    +            +           +            -            -                          *
                                                                                          细胞数
                  shDNMT1    -            -           -            +            +         200
                     shp16   -            -           -            -            +         100

                                                                                            0
                                                                                          ox⁃LDL -  +  +  +  +
                                                                                       Ti.(μmol/L)-  -  40  40  40
                                                                                           shNC +  +  +  -  -
                                                                                        shDNMT1 -  -  -  +  +
                                                                                           shp16 -  -  -  -  +
              F    ox⁃LDL      -                 +                +                 +                 +
                Ti.(μmol/L)    -                 -                40                40                40
                     shNC      +                 +                +                 -                 -
                  shDNMT1      -                 -                -                 +                 +
                    shp16      -                 -                -                 -                 +
                        Q1⁃UL     Q1⁃UP   Q1⁃UL     Q1⁃UP  Q1⁃UL      Q1⁃UP  Q1⁃UL      Q1⁃UP  Q1⁃UL     Q1⁃UP
                        0.0%      0.6%    0.3%      5.6%   0.0%       2.7%   0.2%       6.2%   0.0%      2.7%
                     PI
                            Q1                Q1                Q1               Q1                Q1
                        Q1⁃LL      Q1⁃LP  Q1⁃LL     Q1⁃LP  Q1⁃LL      Q1⁃LP  Q1⁃LL      Q1⁃LP  Q1⁃LL      Q1⁃LP
                        98.3%      1.1%   88.6%     5.5%   94.7%      2.6%   87.7%      5.9%   94.2%      3.0%

                                                               Annexin V
                 细胞分别转染shDNMT1、shp16以及相关对照,转染6 h后换液,分别给予替格瑞洛和ox⁃LDL处理。48 h后,细胞进行后续处理。A:qPCR
              实验检测p16的mRNA丰度;B:蛋白免疫印迹实验检测p16的蛋白量;C:CCK8实验检测细胞活力;D:EdU实验检测细胞增殖能力(×200)及计量统
              计,红色代表EdU阳性细胞,Hoechst代表所有细胞的细胞核,粉色代表EdU阳性细胞与Hoechst标记的细胞的重合;E:小室迁移实验检测细胞迁
              移能力(×200)及计量统计,蓝紫色代表迁移到小室外膜的细胞;F:流式凋亡实验检测细胞凋亡情况。β⁃actin为内参。两组比较,P < 0.01。
                                                                                                   *
                                        图6  DNMT1/p16通路调控ox⁃LDL诱导的HUVECs损伤
                             Figure 6 DNMT1/p16 pathway regulated the damage of HUVECs induced by ox⁃LDL
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