Page 73 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第2期 赖娅娜，曾文滔. 一种高效的成年小鼠同步诱导多细胞胚胎及受精卵的双排卵实验方案［J］.
2023年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（2）：213-217 ·215 ·

A ampulla Oocyte
48 h
发情雌鼠与雄鼠合笼
（周龄：10~20周）。 见栓雌鼠当日 Zygote
16：00注射PMSG，间 次日可同时在壶腹部
隔48 h注射HCG。 获取囊胚和卵子。 2 cell Embryo

8 cell Embryo
未见栓鼠可同时在壶 Blastula
腹部获取8细胞胚胎和卵
子。
B 注射PMSG后8 h、
见栓雌鼠当日 24 h、32 h、45 h分段取
9：00注射PMSG。 胚，分析自然排卵胚胎
减少原因。 ampulla

C
32 hours 注射HCG后再次与 二次见栓鼠可在壳腹
见栓雌鼠当日 9：00 雄鼠合笼。 部同时获取 8 细胞胚胎
注射PMSG、间隔 和受精卵
30 h注射HCG。
注：1、A为实验组，B1、B2为优化依据及方法。
图1 双排卵实验流程图
Figure 1 Flow chart of double ovulation experiment
排卵数分别是 15.1 和 16.6 枚，两者没有统计学差 理组在 2 细胞至 8 细胞期发育时期一致，囊胚期发

异。常规双排卵实验组8只小鼠共获得二次排卵205 育形态差距较大。在80 h对照组处于3级扩张期晚
枚，平均25.6枚/只，相对其他两个对照组16.6枚/只和 期，部分囊胚达到 4 级孵化期，囊胚形态扁长，实验

15.1 枚/只差异显著(P < 0.01）。双排卵实验组的 8 组处于3级扩张期，形态圆润立体，透明带外无孵化
只鼠中有4只取出自然发育的囊胚期胚胎16枚，所 点（图3）。
有胚胎均在壶腹部，子宫及近子宫输卵管无任何形 2.3 双排卵实验方案的优化
态卵子或胚胎。 优化双排卵实验组 18 只鼠入组，其中 16 只鼠

2.2 外源PMSG对自然受孕一次胚胎发育的影响 取到 187 枚由一次排卵发育而来的 8 细胞胚胎，平
自然交配见栓的小鼠在注射PMSG后于各时间 均每只鼠收集到一次排卵胚胎 11.7 枚。所有优化
节点观察自然排卵胚胎的发育情况。自然排卵胚 双排实验组小鼠均成功诱导二次排卵，共获得 MⅡ
胎在小鼠注射 PMSG 后的 8、24、34 h 依然存在于壶 期卵子及受精卵 838 枚、退化胚 85 枚，两次排卵总
腹部中。在48 h随着壶腹部消失，仅部分小鼠在原 共获得 1 110 枚卵子和多细胞胚胎，平均每只 61.7
壶腹部位置可以检测到少量胚胎，而对输卵管和子 枚，显著高于常规双排卵实验组（31.8 枚），P < 0.01
宫冲洗未发现胚胎存在（图2）。 （表 2）。异常胚为萎缩、碎裂和溶解 3 种状态，具体
对照组（没有进行外源 PMSG 注射）与 PMSG 处 归为未受精、死亡或异常卵母细胞未做分类和评
表1 超排方案对小鼠排卵效果的影响
Table 1 Effect of superovulation scheme on ovulation in mice （n）
入组 总卵数（一 次 均只 自然见栓一次排卵 异常胚 超排二次排卵
组别 小鼠 胚+二次卵细 排卵 一次胚检出 一次胚胎/ 均只见胚/ 总数/均 二次排卵 二次排 均只排
总数 胞+异常胚） 数 小鼠只数 排卵数 排卵数 只数 检出只数 卵总数 卵数
常规双排卵实验组 8 254 31.8 4 016 04.0 33/4.1 8 205 25.6
随机超排对照组 7 116 16.6 7 116 16.6 — — — —
自然排卵对照组 7 106 15.1 7 106 15.1 — — — —