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第43卷第3期            杨   燕，张向荣. 结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变与耐药水平的相关性研究［J］.
                  2023年3月                     南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（3）：392-396                        ·393 ·


                        ［1］
                进行分类 ：耐 INH 结核病、耐利福平结核病、耐多                        1.3  统计学方法
                药结核病、准广泛耐药结核病和广泛耐药结核病。                                采用SPSS26.0进行统计分析，计数资料用百分
                耐INH结核病是只对INH耐药，对其他一线、二线结                         率表示，两组间比较采用卡方检验或 Fisher 精确概
                核药物均敏感的结核病；准广泛耐药结核病是对利                            率检验（n<40或T<1），等级资料组间比较行Kruskal
                福平和任何氟喹诺酮类药物（一类、二线抗结核药                            ⁃Wallis秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
                物）具有耐药性的结核病；广泛耐药结核病是对利
                                                                  2  结 果
                福平、任何氟喹诺酮类药物以及贝达喹啉和利奈唑
                胺中的至少一种具有耐药性的结核病。由于南京                             2.1  表型药敏与分子药敏结果的比较
                中医药大学附属南京医院无法检测贝达喹啉和利                                 1 712 例行表型药敏测定，敏感 1 308 例，耐药
                奈唑胺表型药敏，因此本研究把研究人群分为耐                             404例。663例同时行表型药敏和分子药敏实验，分
                INH、耐多药和准广泛耐药3类。所有患者HIV检测                         子药敏结果为99例未检出，检出阳性564例，检出率
                均为阴性。本研究经医院伦理委员会批准，所有患                            为85.1%，其中分子药敏结果敏感390例、耐药174例
                者知情同意。                                           （表 1），耐药基因突变位点为 katG315、inhA 启动子

                1.2  方法                                           和 AhpC 启动子。564 例表型及分子药敏均阳性的
                1.2.1 MTB培养及表型药敏鉴定                                患者中，以表型药敏为金标准，分子药敏检出 INH
                    采 用 MTB 改 良 罗 氏 或 BACTECMGIT960 行             耐药的灵敏度为 92.4%（95%CI：88.5%~96.4%），特
                MTB培养，利用PNB培养基能够抑制牛分枝杆菌以                          异度为 96.2%（95%CI：94.3%~98.1%），阳性预测值
                及结核分枝杆菌但不能抑制非结核分枝杆菌、TCH                           为 91.4%（95%CI：87.2%~95.5%），阴性预测值为
                培养基能抑制牛结核分支杆菌但不能抑制结核分                             96.7%（95%CI：94.9%~98.4%），约登指数 88.6%，准
                枝杆菌以及非结核分枝杆菌的特点，进行阳性标本                            确率 95.0%。表型药敏结果为敏感的 392 例中，分
                的菌种鉴定。对培养和鉴定出的人型结核分枝杆                             子药敏结果耐药15例（表1），其中耐药基因katG315
                菌菌株采用绝对浓度法固体药敏试验检测 INH 耐                          突变 18 次，inhA 启动子突变 5 次，AhpC 启动子突
                                                                                                              2
                药性，设置高、低两个 INH 浓度（分别为 10 μg/mL                    变 13 次，各位点突变率差异无统计学意义（χ =
                和 1 μg/mL），取菌液 0.1 mL，分别接种至两支对照                   0.632，P=0.825）。表型药敏结果为耐药的172例中，
                管（中性改良罗氏培养基）和高浓度、低浓度含药培                           分子药敏检出耐药 159 例（表 1），其中耐药基因
                养基的表面。菌落生长＜20个菌落，报告为实际菌                           katG315突变126次，inhA启动子和AhpC启动子突变
                落数；菌落生长占斜面面积1/4为耐药1+；菌落生长                         分别为25次和 15 次，katG315基因突变的发生率显
                                                                                                       2
                占斜面面积1/2为耐药2+；菌落生长占斜面面积3/4                        著高于 inhA 启动子和 AhpC 启动子（χ =123.915、
                为耐药 3+；全斜面生长，菌落融合为耐药 4+。被检                        151.891，P＜0.001）。提示 katG315 基因突变与 INH
                菌株在无药对照培养基上生长良好、含药培养基斜                            耐药密切相关。
                面无菌落生长为敏感；生长菌落≥20 个为耐药。高
                                                                          表1   表型药敏与分子药敏结果的比较              （n）
                浓度和低浓度含药培养基均耐药为高度耐药，仅低
                                                                                       表型药敏
                浓度含药培养基耐药为低度耐药。                                      分子药敏                                 合计
                                                                                    耐药         敏感
                1.2.2  荧光 PCR 检测 INH 耐药基因进行分子药敏                      耐药             159        015        174
                判断                                                   敏感             013        377        390
                    使用厦门至善生物科技有限公司生产的针对                              合计             172        392        564
                INH的MTB耐药突变检测试剂盒，严格按照说明书
                操作。将送检的 MTB 菌株提取的 DNA 经扩增和熔                       2.2  分子药敏为耐药MTB的表型药敏结果
                解曲线分析后，通过检测标本与野生型阳性对照退                                174例分子药敏为耐药的患者中表型药敏为敏
                火温度（Tm）峰值的差异，判断是否耐药。标本4个                          感的有 15 例，低度耐药 107 例，高度耐药 52 例（表
                通道的Tm值均与阳性对照的Tm值误差不超过1 ℃，                         2）。52 例表型高度耐药中，检测出 katG315 突变共
                判断为野生型，为分子药敏敏感；标本4个通道任一                           41 次，inhA 突变共 8 次，AhpC 突变共 7 次，katG315
                通道的Tm值与阳性对照相差2 ℃或以上，判断为突                          突变率显著高于 inhA 和 AhpC 启动子（χ =39.510、
                                                                                                        2
                变型，为分子药敏耐药。                                       42.146，P＜0.001），提示katG315突变与INH高度耐
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