Page 58 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第3期
               ·348 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年3月


              A                                               B
                                      MEF                                             RPE1
                       PFA            MeOH           TCA                PFA           MeOH            TCA


                 SMO                                              SMO






                 GPR161                                           GPR161





                            每组3个图，左侧为共标记图像，右上为AC⁃α Tubulin标记染色，右下为相应的蛋白标记染色（×630）。
                       图3 不同固定方法对MEF细胞（A）和RPE1细胞（B）内SMO和GPR161的纤毛定位免疫荧光的影响
              Figure 3  Effects of different fixation methods on immunofluorescence of SMO and GPR161 in proteins cilia of MEF（A）
                       and RPE1 cells（B）

             “分别聚集在 TZ 区两侧”的形态为准，MEF 细胞和
                                                                ［参考文献］
              RPE1 细胞的染色效果之间也出现了差异，在一种
                                                                ［1］ ANVARIAN Z，MYKYTYN K，MUKHOPADHYAY S，et
              细胞中可以成功染色的固定方法在另一种细胞中
                                                                     al. Cellular signalling by primary cilia in development，or⁃
              反而表现不佳。这种现象可能源于两种细胞蛋白
                                                                     gan function and disease［J］. Nat Rev Nephrol，2019，15
              表达的差异，或是源于抗体与不同种属细胞蛋白结
                                                                    （4）：199-219
              合效果的差异。类似的是，INPP5E 在 MEF 细胞中
                                                                ［2］ CHIH B，LIU P，CHINN Y，et al. A ciliopathy complex at
              荧光信号很差，而在RPE1细胞中非常清晰，但是两                               the transition zone protects the cilia as a privileged mem⁃
              种细胞间不同固定方法的染色效果相似。作为间                                  brane domain［J］. Nat Cell Biol，2012，14（1）：61-72
              接与轴丝相结合的蛋白，INPP5E的免疫荧光染色效                         ［3］ LECHTRECK K F. IFT ⁃ cargo interactions and protein
              果不仅与轴丝蛋白AC α⁃Tubulin的免疫荧光染色效                           transport in cilia［J］. Trends Biochem Sci，2015，40（12）：
              果基本没有关联，甚至在纤毛转运蛋白染色中表现                                 765-778
              出众的 MeOH 固定法会几乎完全破坏 INPP5E 在纤                     ［4］ GOETZ S C，ANDERSON K V. The primary cilium：a sig⁃
                                                                     nalling centre during vertebrate development［J］. Nat Rev
              毛中的免疫荧光定位。
                                                                     Genet，2010，11（5）：331-344
                  一些文献曾报道使用优化的固定方法，均是在
                                                                ［5］ REITER J F，LEROUX M R. Genes and molecular path⁃
              这 3 种方法的基础上进行改良，精力所限本研究无
                                                                     ways underpinning ciliopathies［J］. Nat Rev Mol Cell Biol，
              法全部进行尝试。此外，不同实验室的实验效果也
                                                                     2017，18（9）：533-547
              存在不同，例如有报道使用MeOH固定细胞后，免疫                          ［6］ WANG W，JACK B M，WANG H H，et al. Intraflagellar
              荧光染色显示 IFT88 聚集于纤毛两端，且在纤毛转                             transport proteins as regulators of primary cilia length［J］.
              运功能受损的细胞中，IFT88 异常地聚集于纤毛底                              Front Cell Dev Biol，2021，9：661350
              部 ［18］ ；而另一项研究使用PFA固定细胞后的染色结                      ［7］ MELEPPATTU S，ZHOU H X，DAI J，et al. Mechanism of
              果显示 IFT88 沿整根纤毛分布            ［19］ ，前者如果使用              IFT⁃a polymerization into trains for ciliary transport［J］.
              PFA固定法可能观察不到如此明显的组间差异。另                                Cell，2022，185（26）：4986-4998
                                                                ［8］ SUN S F，FISHER R L，BOWSER S S，et al. Three⁃dimen⁃
              有报道在 TZ 蛋白 MKS1 的免疫荧光染色中特意使
                                                                     sional architecture of epithelial primary cilia［J］. Proc
              用TCA固定     ［12］ ，但染色效果不如其他研究使用的优
                                                                     Natl Acad Sci U S A，2019，116（19）：9370-9379
              化MeOH固定法      ［11，20］ 。，这些差异一定程度上可能源
                                                                ［9］ WLOGA D，JOACHIMIAK E，LOUKA P，et al. Posttrans⁃
              于各实验室固定时的操作不同或所用抗体不同。
                                                                     lational modifications of tubulin and Cilia［J］. Cold
              总的来说，当研究纤毛定位蛋白时，可能需要多次                                 Spring Harb Perspect Biol，2017，9（6）：028159
              尝试，最终根据免疫荧光实验观察的重点来选择效                            ［10］ EVE A. Arl13b regulates sonic hedgehog signaling from
              果最好的固定方法。                                                                         （下转第379页）
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