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第45卷第10期
               ·1420 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2025年10月


              调整阈值并去除背景光后输出参数图。                                 文献发现，Stambpl1、Slc15a3、Myo1f、Top2a、Mki67、
                  使用普利来酶法试剂盒对 TG 含量进行检测，                        Atp6v0d2这6个核心基因在脂代谢领域尚无相关报
              使用细胞裂解液将细胞刮下后室温静置 10 min，将                        道，因此后续对这6个基因进行分析。
              裂解液分为两部分，一部分经高速离心后利用BCA                           2.3  数据库验证hub gene的表达
              蛋白浓度试剂盒检测浓度，另一部分经70 ℃加热后                               在 GSE138632 数据集中验证 hub gene 的表达，
              检测TG含量。最后使用蛋白浓度校准TG含量。                            结果发现，Stambpl1 在 HFD 后升高最显著（图 3A）。
              1.3  统计学方法                                        接着，通过 ROC 曲线分析预测 hub gene 在 HFD 诱
                  所有计量数据均使用 GraphPad Prism 软件分                  导肥胖发生中的诊断价值，结果显示 Stambpl1 的
              析，定量数据用均数±标准误（（x ± sx））进行描述，两                     ROC 曲线下面积（area under the curve，AUC）最大，
              组数据比较采用双尾t检验，P < 0.05为差异有统计                       表明 Stambpl1 对肥胖的发生发展有较好的预测能
              学意义。                                              力（图3B）。
                                                                     HFD 诱导的肥胖小鼠 eWAT 中脂肪分解相关
              2 结    果
                                                                基因表达降低，而 iWAT 中脂肪分解和脂肪生成相

              2.1  差异基因筛选及富集分析                                  关基因的表达水平升高            ［13］ 。实验结果显示在 HFD
                  利用在线工具 GEO2R 对数据集 GSE37218 中                  后，围脂滴蛋白 1（perilipin 1，Plin1）在 eWAT 中降
              HFD 小鼠的 eWAT 芯片数据和普通饮食小鼠的                         低而在 iWAT 中升高，与前期文献报道一致。此
              eWAT 芯片数据进行差异分析，共获得 HFD 后上                        外，Stambpl1在HFD诱导的肥胖小鼠eWAT和iWAT
              调的差异基因 532 个，下调的差异基因 495 个；同                      中表达均明显升高（图3C）。因此，Stambpl1可能作
              样对 GSE30247 数据集进行差异分析，共获得 HFD                     为肥胖相关基因，在肥胖的发生发展中发挥一定的
              后 上 调差异基因 1 094 个，下调差异基因 707 个                    作用。
             （图 1A）。以 P < 0.05、log2FC>1.5 为筛选标准，获得              2.4  稳定过表达Stambpl1的3T3⁃L1细胞株构建
              GSE37218 和 GSE30247 数据集中共同上调的基因                        将 PCR 扩增产物和酶切后的载体进行同源重
              57 个（图 1B）。将这些差异基因进行 GO 富集，结果                     组连接，连接产物转化涂板后挑取单菌落进行扩增
              显示在HFD 诱导的小鼠eWAT 中，上调基因与白细                        和测序，测序结果显示过表达载体构建成功。 将过
              胞、巨噬细胞等炎症发生相关（图 1C）。MP 和 HPO                      表达载体包装成慢病毒后感染3T3⁃L1细胞，细胞经
              富集结果也显示上调的差异基因与免疫炎症相关                             嘌呤霉素筛选后收样，检测 Stambpl1 过表达效率，
             （图1D）。                                             结果显示Stambpl1表达显著升高（图4）。
                  多项研究证实，脂肪组织的慢性轻度炎症不仅                          2.5  过表达 Stambpl1 抑制 3T3⁃L1 细胞中 OA 诱导
              与肥胖人群的代谢性疾病及相关并发症的发生相                             的脂质累积
              关，而且脂肪组织炎症的发生还会对机体远端器官                                 为了探究 Stambpl1 在脂肪细胞中的功能，使用
              功能产生负面影响         ［12］ 。本研究表明在HFD诱导后，              300 μmol/L OA 处理 3T3⁃L1 细胞以诱导脂质累积，
              小鼠脂肪组织中上调的基因与炎症的发生具有相                             然后使用荧光染料进行细胞器染色。Hoechst 是一
              关性。                                               种 可 以 与 细 胞 中 DNA 特 异 性 结 合 的 染 料         ［14］ 。
              2.2  PPI网络的构建及hub gene的筛选                         Hoechst染色成功定位了 3T3⁃L1的细胞核；BODIPY
                  将差异基因导入 STRING12.0 数据库后初步构                    具有亲脂性，是针对脂滴的小分子探针                  ［15］ ，BODIPY

              建PPI网络。将构建的PPI网络导入Cytoscape10.3.2                 脂滴染色结果显示，过表达 Stambpl1 的 3T3⁃L1 细
              中以 Closeness Centrality 为标准进一步绘制 PPI 网            胞脂滴数量少于对照组细胞（图 5A）。对荧光强
              络图（图2A），使用CytoHubba插件来筛选hub gene，                 度的定量分析结果同样表明过表达 Stambpl1 的
              为了提高可信度，使用 CytoHubba 中的 BottleNeck、               3T3⁃L1细胞内脂滴数量低于对照组细胞（图 5B）。
              Betweenness 和 Stress 3 种算法分别获取得分最高的               同时检测了 3T3⁃L1 细胞中 TG 含量，结果表明过

              20个基因（图2B）。之后将3种算法获得的hub gene                     表达 Stambpl1 的 3T3⁃L1 细胞与对照组细胞相比，
              取交集，最终得到 Ccr5、Gpnmb、Timp1、Itgax、Ubd、              细胞内 TG 含量明显降低（图 5C）。以上结果表明，
              Lcp1、Atf3、Stambpl1、Slc15a3、Myo1f、Top2a、Mki67、     Stambpl1 可以抑制 3T3⁃L1 细胞中 OA 诱导的脂质
              Atp6v0d2 这 13 个 hub gene（图 2C、D）。进一步检索            累积。
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