Page 72 - 南京医科大学自然版

第45卷第11期
·1602 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年11月

Nb48蛋白分子量符合预期（图3A）。纯化得到的Nb 行深入研究。ELISA实验证实了4 种Nb对Delta⁃RBD
纯度较高，可用于进一步研究。 和 Omicron⁃RBD 的亲和力。值得注意的是，除了
通过 ELISA 检测了 4 种 Nb 对 WT⁃RBD 的亲和 Nb48 对 Delta 和 Omicron 突变株表现出亲和力稍弱
力，结果表明，4 种 Nb 在 450 nm 处均具有较高的吸 外，其他 Nb 均表现出较高的亲和力（图 4A、B）。
光度（图 3B）。并且，通过后续实验计算得出各纳 进一步实验探究了 Nb34、Nb42 和 Nb45 对突变株
米抗体的 EC50 均低于 20 nmol/L，说明这 4 种 Nb 对 RBD 的 EC50，结果显示 3 种 Nb 对 Delta⁃RBD（EC50
WT⁃RBD具有良好的亲和力（图3C）。 分 别 为 18.94 nmol/L、6.93 nmol/L、6.64 nmol/L）和

2.4 Nb 有效结合SARS⁃CoV⁃2变体 Omicron⁃RBD（EC50分别为7.95nmol/L、13.59 nmol/L 和
由于 SARS⁃CoV⁃2 突变会导致其逃避结合抗体 8.91 nmol/L）均具有良好的亲和力（图4C~E）。
的中和，对 4 种 Nb 与 SARS⁃CoV⁃2 变体的亲和力进 此外，本研究通过生物膜干涉技术评估了这3个

A B
50 P2⁃B4
P1⁃C3
40
Ratio of control 30 P2⁃F2
P2⁃H6
P1⁃C7
20
P2⁃H2
P1⁃C8
10
P1⁃E3
3
0 P2⁃B1
0 50 100 150 200 P1⁃G2
Clones P1⁃B1
P2⁃B5
P2⁃A1
P1⁃H4
P1⁃G5
P1⁃H6
P1⁃A8
P1⁃H5
P2⁃F7
P1⁃G3
P1⁃A1
P1⁃B6
P1⁃E6
P2⁃H3
P2⁃G2
P2⁃C2
P2⁃A7
P2⁃B8
P1⁃F3
P1⁃B4
P1⁃A2
P1⁃C2
P1⁃F8
P1⁃C9
P1⁃A3
P1⁃F1
P2⁃E3
P1⁃E8
P2⁃A2
P1⁃F7
P1⁃E2
P1⁃B3
P2⁃E1
P2⁃C6
P2⁃D2
P1⁃D5
P1⁃F4
P2⁃D5
A：Clones with a binding rate greater than 3 were identified as positive clones through the PE⁃ELISA experiment. B：A phylogenetic tree targeting
the SARS⁃CoV⁃2 RBD binding domain nanobody was constructed using the neighbor⁃joining method in Clustal Omega.
图2 Nb文库阳性克隆筛选及系统发育树的建立
Figure 2 Screening of positive clones of nanoabodies library and establishment of a phylogenetic tree