Page 73 - 南京医科大学自然版

第45卷第11期 汪佰成，倪晶怡，刘馨月，等. 广谱中和新型冠状病毒及其变体的纳米抗体制备及功能研究［J］.
2025年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（11）：1598-1607 ·1603 ·

A B C
（kDa） Nb34 Nb42 Nb45 Nb48
RBD
180 Nb34 EC50=5.71 nmol/L
130 2.5 CBS
100 Nb42 EC50=16.63 nmol/L
70 * * * * Nb45 EC50=17.23 nmol/L
nm） 2.0
55 1.5 2.5 Nb48 EC50=16.44 nmol/L
（450 1.0
40
35 D nm） 2.0
0.5 1.5
（450 1.0
25 0
Nb34 Nb42 Nb45 Nb48 D
0.5
15 0
5 000 1 000 500 100 50 10 5 1
10
WT⁃RBD（ng/mL）
A：The nanobodies were expressed through the Pichia pastoris expression system and then purified，followed by stained with Coomassie brilliant
blue. B：The ELISA experiment verified that all four nanobodies had affinity for WT⁃RBD. Compared with the blank control group，P < 0.05. C：Different
concentrations of WT⁃RBD were used to conduct ELISA experiments with the four nanobodies respectively to obtain the D（450 nm）value，and the EC50
was calculated（n=3）.
图3 Nb的表达纯化及与WT⁃RBD的结合
Figure 3 Expression and purification of Nbs and binding to WT⁃RBD

A B
2.0 * * * RBD 2.0 RBD
CBS * CBS
nm） 1.5 * 1.5 * *
（450 1.0 （450 nm） 1.0 *
D
0.5 D 0.5
0 0
Nb34 Nb42 Nb45 Nb48 Nb34 Nb42 Nb45 Nb48
C D E
2.5 2.5
Nb34 Nb34 Delta⁃RBD Omicron⁃RBD
Nb EC50 EC50
Nb42
nm） 2.0 Nb45 nm） 2.0 Nb45 （nmol/L） （nmol/L）
Nb42
1.5
1.5
7.95
（450 D 1.0 （450 D 1.0 34 18.94 13.59
6.93
42
0.5 0.5 45 6.64 8.91
0 0
5 000 1 000 500 100 50 10 5 1 5 000 1 000 500 100 50 10 5 1
Delta⁃RBD（ng/mL） Omicron⁃RBD（ng/mL）
A，B：ELISA experiments demonstrated that except for Nb48，the other three nanobodies had high affinities for both Delta⁃RBD（A）and Omicron⁃
RBD（B）. Compared with the blank control group，P < 0.05. C-E：ELISA experiments were conducted using different concentrations of Delta⁃RBD（C）
and Omicron⁃RBD（D）with the four nanobodies to obtain the D（450 nm）and EC50 （E）was calculated（n=3）.
图4 Nb与Delta⁃RBD及Omicron⁃RBD的结合
Figure 4 Nanobodies bind to Delta⁃RBD and Omicron⁃RBD

Nb 与 Omicorn⁃RBD 的结合动力学。结果显示 3 种 变株假病毒起效。实验结果与预期相符，与Nb45共
Nb均表现优越（表1）。这些结果表明，这几种Nb可 孵育后，Omicron 突变株假病毒进入 GFP 阳性的
以有效地中和Delta⁃RBD和Omicron⁃RBD。 293T⁃ACE2 细胞的数量明显减少。定量实验显示，

2.5 Nb45体外抑制Omicron突变株假病毒的感染 与 200 μmol/L Nb45 共孵育后，Omicron 突变株假病
如前所述，Nb45 与 SARS⁃CoV⁃2 变体具有良好 毒进入 GFP 阳性的 293T⁃ACE2 细胞的数量减少了
结合能力，进一步研究Nb45是否也能对Omicron 突 93%（图 5）。这些结果表明，Nb45 是一种有效的