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第45卷第11期
·1604 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年11月

表1 BLI验证亲和力 SARS⁃CoV⁃2及其变体的中和Nb。
Table 1 BLI verification of affinity 2.6 分子对接分析
Name KD（x ± s） R 2 为了直观地评估4种Nb的广泛中和作用，使用
-7
Omicron⁃RBD+Nb34 2.118×10 ± 1.801×10 -8 0.932
AlphaFold2 等工具来构建分子模型，并将抗原与抗
-8
Omicron⁃RBD+Nb42 5.349×10 ± 3.575×10 -9 0.892
体对接。图 5 显示了每个 Nb 与 SARS⁃CoV⁃2 原始
-7
Omicron⁃RBD+Nb45 5.974×10 ± 3.877×10 -8 0.892
株、Delta 变体和 Omicron 变体之间的相互作用。其
A B
Pseudovirus Omicron strain Pseudovirus+50 μmol/L Nb45 *
（%） 150 * *
Relative activity 50
100

0
Blank 100 μmol/L
50 μmol/L
200 μmol/L
Pseudovirus+100 μmol/L Nb45 Pseudovirus+200 μmol/L Nb45

A：The green in the fluorescence image indicates the Omicron pseudovirus，and the blue represents 293T cells. B：The bar graph shows that com⁃
*
pared with the blank control，Nb45 prevents the entry of the Omicron pseudovirus into 293T cells. P < 0.05，n=3）.
图5 Nb45阻止Omicron假病毒进入293T细胞
Figure 5 Nb45 prevents Omicron pseudovirus entry into 293T cells

中，红色标记表示Nb位点，蓝色标记表示RBD位点 力，并证实Nb45具有中和Omicron 变体假病毒的能
（图 6A）。进一步分析显示，预测的结合位点均属 力。此外，本研究还证明了这4 种Nb具有较高的热
于保守位点，这就证明了 4 种Nb对SARS⁃CoV⁃2及 稳定性和 pH 稳定性。通过预测 Nb 与 RBD 相互
其更多变体广泛的中和潜力（图6B）。 作用的结构，进一步阐明了它们中和 SARS⁃CoV⁃2
2.7 Nb具有优越的理化特性 及其变体的机制。这一策略成功获得能够识别
为了测试 Nb 的物理稳定性，将 4 种 Nb 暴露在 SARS⁃CoV⁃2 及其变体的广谱 Nb，并且这种方法广
不同条件下，包括不同温度和 pH 值（图 7）。在 RT 泛适用于防治不断变异的病毒，如流感病毒、艾滋
和 40、60、80、90 和 95 ℃下孵育 10 min 后，4 种 Nb 病毒等。这项研究为推进多种病毒的疫苗以及诊
均保持着良好的亲和力（图7A）。在37 ℃下，10 d内 断方法的开发提供了新思路。
4种Nb 活性保持在70%左右（图7B）。即使在95 ℃ SARS⁃CoV⁃2 是一种单链阳性 RNA 病毒，属于
孵育 2 h 后，4 种 Nb 的结合活性仍均>75%（图 7C）。 乙型冠状病毒属 ［10-11］ 。SARS⁃CoV⁃2 的刺突蛋白是
另外，4种Nb的结合活性在环境酸碱度达到一定程 一种三聚体跨膜蛋白，由2个功能亚基——S1和S2
度后才会受到限制（图7D）。上述结果表明，这4种 组成。S1 亚基，特别是其 RBD，通过与人血管紧张
Nb是高度稳定的，它们的用途必将不会受限于临床 素转换酶 2（angiotensin converting enzyme2，ACE2）
运输和保存等。 结合，在促进病毒进入宿主细胞当中发挥着关键作
用 ［12-13］ 。因此，SARS⁃CoV⁃2 刺突蛋白，尤其是 RBD
3 讨 论
结合域，是各类研究主要的抗原靶点，如开发检测
本研究利用 WT⁃RBD 免疫羊驼建立噬菌体文 试剂盒、疫苗、中和抗体以及病毒抑制剂等。虽然
库，随后通过Delta⁃RBD对文库进行筛选，诱导表达 目前有诸多针对刺突蛋白特别是 RBD 的单克隆抗
后获得了4株Nb，即Nb34、Nb42、Nb45、Nb48。实验 体，但是 SARS⁃CoV⁃2 的不断变异提高了其免疫逃
证明其与SARS⁃CoV⁃2及其变体具有良好的结合能 逸能力，从而降低了这些抗体的中和能力 ［14-17］ 。因