Page 75 - 南京医科大学自然版

第45卷第11期 汪佰成，倪晶怡，刘馨月，等. 广谱中和新型冠状病毒及其变体的纳米抗体制备及功能研究［J］.
2025年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（11）：1598-1607 ·1605 ·

A WT⁃RBD+Nb34 WT⁃RBD+Nb42 WT⁃RBD+Nb45 WT⁃RBD+Nb48

Delta⁃RBD+Nb34 Delta⁃RBD+Nb42 Delta⁃RBD+Nb45 Delta⁃RBD+Nb48

Omicron⁃RBD+Nb34 Omicron⁃RBD+Nb42 Omicron⁃RBD+Nb45 Omicron⁃RBD+Nb48

B WT⁃RBD RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFK 60
Delta⁃RBD RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFK 60
Omicron⁃RBD RVQPTESIVRFPNITNLCPFDEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNLAPFFTFK 60
WT⁃RBD CYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNS 120
Delta⁃RBD CYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNS 120
Omicron⁃RBD CYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGNIADYNYKLPDDFTGCVIAWNS 120
WT⁃RBD NNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQ 180
Delta⁃RBD NNLDSKVGGNYNYRYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSKPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQ 180
Omicron⁃RBD NKLDSKVSGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGNKPCNGVAGFNCYFPLRSYSFR 180
WT⁃RBD PTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF 223
Delta⁃RBD PTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF 223
Omicron⁃RBD PTYGVGHQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF 223
A：Molecular models of four nanobodies binding to different RBDs，with red labels indicating nanobody sites and blue labels indicating RBD sites.
B：Sequence comparison of WT⁃RBD，Delta⁃RBD and Omicron⁃RBD，with red indicating the mutation sites of the mutants and yellow background indi⁃
cating the predicted binding sites of each RBD with the four nanobodies，and all predicted binding sites are conserved sites.
图6 Nb与RBD结合分子模型及位点分析
Figure 6 Molecular modeling and site analysis of nanobodies binding to RBD

此，通过更优的筛选策略获得抗体以应对病毒突变 断其与 ACE2 的相互作用，这 2 种 Nb 的 EC50分别为
带来的挑战尤为重要。 61 nmol/L 和161 nmol/L，不过它们与其他变体的亲
在病毒的流行过程中，它们的基因突变率和重 和力尚待验证。Lu 等 ［23］ 分别获得了靶向 S 蛋白
组率很高，这是其能够引起季节性甚至全球性流行 （Nb91⁃hFc）、靶向 WT⁃RBD（Nb3⁃hFc）以及同时靶
病的关键因素 ［18］ 。随着病毒的抗体中和位点基因 向 S 蛋白和 WT⁃RBD（Nb35⁃hFc）的 Nb，然而这些
发生突变并广泛传播，原来疫苗的有效性会随之降 Nb对其他多种变体的亲和力同样有待考证。现有
低，导致病毒能够部分逃避抗体识别 ［19-20］ 。虽然现存 研究所描述的 SARS⁃CoV⁃2 中和 Nb 的亲和效力不
的COVID⁃19 疫苗对预防 SARS⁃CoV⁃2 感染有效，但 同，EC50从 61 nmol/L 到近 1 300 nmol/L ［4，24-25］ 。本研
由于接种疫苗引起的免疫反应不断下降以及新变 究中 Nb34 对 WT⁃RBD 的结合活性最强，EC50值为
体的不断出现显著地增加了感染 SARS⁃CoV⁃2 的 5.71 nmol/L。另外，其他3 个 Nb与 WT⁃RBD 结合的
风险 ［21］ 。因此，需要制备能够靶向新变体的广谱中 EC50值也<18 nmol/L。另外，除Nb48外，其余3个 Nb
和抗体。 与 Delta 和 Omicron 变体的结合能力也较强，EC50
目前已有一些研究开发了针对WT⁃RBD的Nb， 在 6.64~18.94 nmol/L。 本 研 究 结 果 为 开 发 针 对
但是效果并不尽如人意。Huo 等 ［22］ 开发了 2 种 Nb SARS⁃CoV⁃2 及其变体的高效治疗方法提供了坚实
（H11⁃D4 和 H11⁃H4）能够靶向结合 WT⁃RBD，并阻 基础。