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第45卷第5期            路   寒，张雪飞，孙学伟，等. 两种小鼠模型在胆汁淤积性肝损伤实验中的应用［J］.
                  2025年5月                     南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（5）：627-636                        ·629 ·


                道微生物发酵膳食纤维的代谢产物，具有抗炎、抗氧                           离心15 min，将血清分离，将血清及部分肝脏组织冻
                化、抗纤维化等作用         ［16-19］ 。本课题组前期研究证明             存于-80 ℃冰箱待测。
                SCFA 可缓解对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤                    ［20］ 。  1.2.2  血清学指标检测
                本研究对BDL模型与ANIT模型导致的胆汁淤积肝                              本研究采用南京建成生物工程有限公司提供
                损伤相关指标进行比较，并使用 SCFA 作为治疗药                         的比色试剂盒对血清中ALT、AST、ALP和TBIL水平
                物，观察两种模型肝损伤的缓解情况，以揭示两种                            进行检测。此外，针对细胞因子白细胞介素⁃6
                模型在胆汁淤积性肝损伤实验中的应用区别。                             （interleukin⁃6，IL⁃6）、白细胞介素⁃1β（interleukin⁃1β，

                                                                  IL⁃1β）和单核细胞趋化蛋白⁃1（monocyte chemoat⁃
                1 材料和方法
                                                                  tractant protein⁃1，MCP⁃1）的检测，使用南京拉普达
                1.1  材料                                           ELISA 试剂盒通过固相化抗体捕获目标分子，结合
                1.1.1  动物                                         酶标记二抗进行信号放大，最终通过450 nm波长下
                    8~10 周龄 SPF 级 C57BL/6雄性小鼠（北京斯贝                吸光度值与重组标准曲线的比对实现定量分析。
                福生物有限公司）。小鼠在动物房内自由饮食，环                            1.2.3  HE染色
                境设置为12 h光照/黑暗循环，温度控制在23 ℃，湿                           将新鲜的肝脏组织浸泡在 4%多聚甲醛中，固
                度控制在 53%。本研究经南京医科大学第二附属                           定 24 h，石蜡包埋，切成 5 μm 厚的切片，二甲苯脱
                医院医学伦理委员会审批（审批号 2022KY05801），                     蜡，无水乙醇水合，HE 染色固定，镜下观察肝脏组
                所有动物实验均按照实验动物护理和使用指南进行。                           织形态变化。参考 Ishak 分级系统            ［21］ 对纤维化分期
                1.1.2  试剂                                         进行判定，扩展以下半定量评分（0~4分）：①汇管区
                    α⁃萘基异硫氰酸酯（Sigma⁃Aldrich公司，美国），                纤维化，0 分为无纤维化；1 分为部分汇管区纤维性
                橄榄油、乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠（上海生物工程），                          扩展，伴或不伴短纤维间隔；2分为大部分汇管区纤
                血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷           维性扩展，伴短纤维间隔；3分为汇管区纤维扩展伴
                草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、总胆红          偶发汇管⁃汇管（P⁃P）桥接；4 分为显著桥接纤维化
                素（total bilirubin，TBIL）及 碱 性 磷 酸 酶（alkaline      （P⁃P和/或汇管⁃中央静脉桥接）或早期结节形成（不
                phosphatase，ALP）检测试剂盒（南京建成），ELISA检                完全肝硬化）。②炎症细胞浸润，0分为无浸润；1分
                测试剂盒（南京拉普达）。                                      为轻度，部分或全部汇管区可见少量淋巴细胞浸
                1.2  方法                                           润；2分为中度，部分或全部汇管区可见中等量淋巴
                1.2.1  动物模型构建及分组                                  细胞浸润；3 分为中⁃重度，全部汇管区可见密集淋
                    适应性喂养1周后，小鼠被随机分至对照组、假                         巴细胞浸润；4分为重度，全部汇管区可见显著密集
                手术（sham）组、BDL 组、BDL+SCFA 组、ANIT 组和                淋巴细胞浸润伴滤泡形成。③胆管增生，0 分为无
                ANIT+SCFA组，每组12只。BDL组和BDL+SCFA组                   增生；1分为轻微增生；2分为轻度增生；3分为中度
                小鼠依照文献［11］进行 BDL 手术，即沿腹中线打                        增生；4 分为重度或结节性增生。④坏死结节，0 分
                开腹部，进入腹膜腔，用棉签沾湿生理盐水提起肝                            为无坏死；1 分为微小坏死灶；2 分为局灶性坏死；
                脏，将胆管从门静脉和肝动脉旁分离出来，用4⁃0 缝                         3 分为多灶融合坏死；4分为大片坏死。
                合线 2 次结扎，但不解剖胆管，以避免胆汁泄漏。用                         1.3  统计学方法
                生理盐水冲洗腹腔，将腹部器官恢复至生理位置，                                使用GraphPad Prism 10软件进行数据分析。各
                随后关闭腹部，观察14 d；Sham组只开腹，不结扎胆                       组数据以均数±标准差（x ± s）表示，组间比较采用单

                管；ANIT 组和 ANIT+SCFA 组小鼠灌胃给药 ANIT                  因素方差分析（one⁃way ANOVA），若ANOVA结果显
               （100 mg/kg，溶于橄榄油），每周 1 次，观察 14 d；                  示显著性差异（P < 0.05），进一步使用Tukey多重比
                BDL+SCFA 组和 ANIT+SCFA 组小鼠在造模后提供                   较检验分析具体组间差异。P < 0.05为差异有统计
                含 SCFA（67.5 mmol/L 乙 酸 钠 、25.9 mmol/L 丙 酸         学意义。
                钠、40 mmol/L 丁酸钠）的水，自由饮用 14 d；对照组
                正常喂养，未特殊处理。在实验进行第 7 天处死对                          2 结    果
                照组、Sham组、BDL组、ANIT组小鼠各6只，第14天处                    2.1 两种模型小鼠的外观表现对比

                死剩余所有小鼠，收集肝脏和血液。血液3 500 r/min                         本研究建立了两种常用的胆汁淤积小鼠模
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