Page 106 - 《南京医科大学学报（自然科学版）》2025年第9期

第45卷第9期
·1318 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年9月

学资料进行回顾性分析，从病理科获得组织蜡块用 色过程中观察染色液的液位；去离子水冲洗 2 min；
于本研究。纳入标准：胸部 CT 提示肺部异常，但缺 5%盐酸乙醇分化液分化2~3 s，直至切片无色；去离
乏典型 TB 表现（TB 的典型胸部 CT 表现包括斑块、 子水冲洗 2 min；美蓝溶液重新染色 20 s；去离子水
空洞影、结节、树芽征、纤维条纹、继发性支气管扩 冲洗2 min；常规脱水、干燥、封片。阳性染色结果为
张、多发钙化、空洞形成，而继发性支气管扩张、多 MTB 呈鲜红色，细长状，微弯曲的杆状或念珠菌样
发性钙化、空洞形成等好发于上叶尖段或后段及 堆状或散在分布，红细胞呈粉红色，细胞核和背景
下叶背段，多种形态的病变共存） ，与肿瘤不能 呈浅蓝色。
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鉴别者；临床表现无典型的 TB 症状如咳嗽、咳痰、 1.2.2 HE染色初筛和评估
咯血及发热等；缺乏痰、肺泡灌洗液等呼吸道分泌 两名病理医生检查HE染色切片，评估7个组织
物 MTB 检测或检测结果为阴性。组织标本来源于 病理学参数：干酪样坏死面积百分比（坏死的脱细胞
EBUS⁃TBNA、PNLB 或外科手术。本研究经南京医 粉红色区域伴有核团状碎片≥25%或<25%），每切片
科大学附属脑科医院（南京胸科医院）伦理委员会 肉芽肿的数目和大小（最大直径≥8 mm 或<8 mm），
批准（2024⁃KY026⁃01），符合赫尔辛基宣言及其后 融合性肉芽肿（多个大小较一致的肉芽肿结节呈融
来的修正案。 合性生长），离散性肉芽肿（边界分明，大部分上皮

1.2 方法 样组织细胞与肉芽肿形状一致），上皮样组织细胞
1.2.1 Z⁃N抗酸染色 带（上皮样组织细胞聚集在坏死的外层），分别评估
石蜡包埋组织切片厚度为 4 μm，在 37 ℃下贴 并记录肉芽肿周围淋巴细胞聚集和朗汉斯巨细胞
片、干燥、烘烤，二甲苯脱蜡2次，每次5 min，去离子 （图1）。
水冲洗 2 min；37 ℃石炭酸红染色液染色 30 min，染 使用 Image J 软件对 HE 染色后的切片进行分

A B C

D E F
A：Thorough caseous necrosis，acellular pink areas of necrosis with karyorrhectic debris. B：Confluent granulomas，merging of the adjacent boundar⁃
ies of granulomas. C：Discrete granuloma with well⁃defined boundaries. D：Lightly stained epithelioid cells aggregate in the outer layer of necrosis. E：
Layers of lymphocytes around the granulomas. F：Langerhans’giant cells.
图1 qPCR阳性病例的病理组织学特征（HE，×200）
Figure 1 Histopathological parameters of qPCR positive samples（HE，×200）
析。将图像导入软件，利用软件测量工具，在适当 试剂盒采用 qPCR 法检测 MTB 特异性插入序列
放大倍数下，选取需要测量的染色区域进行自动计 IS6110 基因。将两端标记有荧光发光基因和淬灭
算并记录相关数据。对于复杂的组织结构，两位资 基因的寡核苷酸探针加入PCR系统中，在PCR过程
深病理医生采用手动勾勒边界的方式进行精准测 中扩增出与探针序列互补的产物，同时实时监测荧
量，以确保获取准确的染色面积数据。 光值变化，通过有无扩增信号来判断是否存 在
1.2.3 qPCR检测 MTB。PCR 反应条件为：37 ℃10 min；95 ℃ 10 min；
按 照 说 明 书 ，用 E.Z.N.A. FFPE DNA 试 剂 盒 95 ℃ 10 s，71 ℃ 15 s（每个循环下降1度），78 ℃ 15 s，

（Omega Bio⁃Tek 公司，美国）提取 DNA，然后用 MTB 10 个循环；95 ℃ 15 s，61 ℃ 15 s（收集荧光信号），
复合体核酸检测试剂盒（厦门致善公司）检测。本 78 ℃ 15 s，45次循环。