Page 64 - 《南京医科大学学报》2026年第1期

第46卷第1期
· 58 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年1月

表1 微型基因剪接载体的特异性引物序列
Table 1 Specific primer sequences of minigene splicing vector
Variant Primer sequence（5′→3′）
I3⁃c.278⁃1G>T Forward TCTCAAATATG GAGATCAGTG TGAG
Reverse ATCTCCATAT TTGAGATAGG TTAAG
I3⁃c.278⁃1G>C Forward TCTCAAACATG GAGATCAGTG TGAG
Reverse ATCTCCATGT TTGAGATAGG TTAAG
I3⁃c.278⁃1G>A Forward TCTCAAAAATG GAGATCAGTG TGAG
Reverse ATCTCCATTT TTGAGATAGG TTAAG
I3⁃c.278⁃2A>T Forward ATCTCAATGATG GAGATCAGTG TGA
Reverse TCTCCATCAT TGAGATAGGT TAAGA
I3⁃c.278⁃3A>G Forward TATCTCAGAGATG GAGATCAGTG TG
Reverse CTCCATCTCT GAGATAGGTT AAGAA
I4⁃c.391+1G>C Forward GAATTA GCTAAGTAACTATTTTTTG
Reverse GTTACTTAGC TAATTCACAG TTCTT
I4⁃c.391+1G>A Forward GAATTA GATAAGTAACTATTTTTTG
Reverse GTTACTTATC TAATTCACAG TTCTT
I4⁃c.391+1G>T Forward GAATTA GTTAAGTAACTATTTTTTG
Reverse GTTACTTAAC TAATTCACAG TTCTT
I4⁃c.391+7A>G Forward GGTAAGTGACTATTTTTTGAATACT
Reverse AAAATAGTCA CTTACCTAAT TCACA
E4⁃c.391delG Forward GTGAATTAGTAAGTAACTATTTTTT
Reverse TTACTTACTAATTCACAGTTCTTTC
I4⁃C.391+1insT Forward GAATTAGTGTAAGTAACTATTTTTT
Reverse TTACTTACACTAATTCACAGTTCTT
I4⁃C.391+2T>A Forward AATTAGGAAAGTAACTATTTTTTGA
Reverse AGTTACTTTCCTAATTCACAGTTCT
I4⁃C.391+2T>C Forward AATTAGGCAAGTAACTATTTTTTGA
Reverse AGTTACTTGCCTAATTCACAGTTCT
I4⁃C.391+5delG Forward TTAGGTAATAACTATTTTTTGAATA
Reverse AATAGTTATTACCTAATTCACAGTT
I4⁃C.391+5G>A Forward TAGGTAAATAACTATTTTTTGAATA
Reverse AATAGTTATTTACCTAATTCACAGT

表2 表达载体的特异性引物序列
Table 2 Specific primer sequences of expression vector
Vector Primer sequence（5′→3′）
F9⁃E4⁃del96bp Forward GTATGTTGGAAAGAACTGTGAATTAGATGTAAC
Reverse GTTCTTTCCAACATACTGCTTCCAAAATTCAGTT
F9⁃E4⁃skipping Forward GTATGTTGATGTAACATGTAACATTAAGAATGGC
Reverse TGTTACATCAACATACTGCTTCCAAAATTCAGT

带的位置，随后将cDNA产物连接至pMD18⁃T载体， ATCTCAGTGGTATTTGTGAGC⁃3′）对 cDNA 产物进
转入感受态细胞，挑取单克隆菌落经PCR验证后进 行毛细管电泳分离，根据不同剪接产物的片段大小
行 Sanger 测序。使用 DNAMAN 软件将测序结果与 及峰面积，定量计算各剪接产物的比例。
野生型序列进行比对分析，同时，采用荧光标记引物 1.2.7 Western blot

（SD6：5′⁃TCTGAGTCACCTGGACAACC⁃3′；SA2：5′⁃ 将瞬时转染后收集的胞内和上清蛋白样品与